Последовательность работ при ремонте: Последовательность ремонта квартиры: Этапы ремонта квартиры

Нуклеотидная эксцизионная репарация используется для коррекции более обширных типов повреждений

Нуклеотидная эксцизионная репарация имеет гораздо более широкую специфичность, чем система базового эксцизии, и способна воздействовать на более серьезные формы повреждений, такие как внутрицепочечные поперечные связи и модифицированные основания путем присоединения больших химических групп. Он также способен исправлять циклобутиловые димеры с помощью процесса восстановления в темноте, предоставляя тем организмам, у которых нет системы фотореактивации (например, людям), средства восстановления этого типа повреждений.

При эксцизионной репарации нуклеотидов сегмент одноцепочечной ДНК, содержащий поврежденный нуклеотид(ы), вырезается и заменяется новой ДНК. Таким образом, этот процесс подобен эксцизионной репарации оснований, за исключением того, что ему не предшествует селективное удаление оснований, и вырезается более длинный участок полинуклеотида. Наиболее изученным примером эксцизионной репарации нуклеотидов является процесс Short patch E. coli , названный так потому, что область полинуклеотида, которая вырезается и впоследствии «зашивается», относительно короткая, обычно 12 нуклеотидов в длину.

Репарация коротких участков инициируется мультиферментным комплексом, называемым эндонуклеазой UvrABC, иногда также называемой «эксинуклеазой». На первой стадии процесса к ДНК в месте повреждения присоединяется тример, состоящий из двух белков UvrA и одной копии UvrB. Как сайт распознается, неизвестно, но широкая специфичность процесса указывает на то, что отдельные типы повреждений не обнаруживаются напрямую и что комплекс должен искать более общий признак повреждения ДНК, такой как искажение двойной спирали.UvrA может быть частью комплекса, в наибольшей степени участвующей в локализации повреждения, потому что он диссоциирует, как только местонахождение найдено, и больше не играет никакой роли в процессе репарации. Уход UvrA позволяет UvrC связываться (), образуя димер UvrBC, который разрезает полинуклеотид по обе стороны от поврежденного сайта. Первый разрез производится UvrB по пятой фосфодиэфирной связи ниже поврежденного нуклеотида, а второй разрез производится UvrC по восьмой фосфодиэфирной связи выше по течению, что приводит к вырезанию 12 нуклеотидов, хотя есть некоторая вариабельность, особенно в положении места разреза UvrB.Вырезанный сегмент затем удаляется, обычно как неповрежденный олигонуклеотид, с помощью ДНК-хеликазы II, которая предположительно отщепляет сегмент, разрывая пары оснований, удерживающие его на второй цепи. UvrC также отделяется на этой стадии, но UvrB остается на месте и перекрывает зазор, образовавшийся в результате иссечения. Считается, что связанный UvrB предотвращает спаривание одноцепочечной области, которая подверглась воздействию, с самой собой, но альтернативные роли могут заключаться в предотвращении повреждения этой цепи или, возможно, в направлении ДНК-полимеразы к месту, которое необходимо отремонтировано. Как и при эксцизионной репарации оснований, разрыв заполняется ДНК-полимеразой I, а последняя фосфодиэфирная связь синтезируется ДНК-лигазой.

. Поврежденный нуклеотид искажает спираль, потому что считается, что это один из сигналов распознавания тримера UvrAB, который инициирует процесс короткого участка. См. текст для (подробнее…)

E. coli также имеет систему эксцизионной репарации длиной нуклеотидов , которая включает белки Uvr, но отличается тем, что вырезаемый фрагмент ДНК может иметь длину до 2 т.п.н.Репарация длинных участков менее изучена, и этот процесс не изучен в деталях, но предполагается, что он работает с более обширными формами повреждений, возможно, с областями, где группы нуклеотидов, а не только отдельные, были изменены. Процесс эксцизионной репарации эукариотических нуклеотидов также называют «длинным участком», но он приводит к замене только 24–29 нуклеотидов ДНК. На самом деле, у эукариот нет системы «коротких заплат», и это название используется для того, чтобы отличить процесс от эксцизионной репарации основания. Система более сложная, чем у E. coli , и соответствующие ферменты, по-видимому, не являются гомологами белков Uvr. У человека задействовано не менее 16 белков, при этом нижний разрез делается в том же положении, что и в E. coli — пятая фосфодиэфирная связь, — но с более удаленным верхним разрезом, что приводит к более длительному вырезанию. Оба разреза осуществляются эндонуклеазами, которые атакуют одноцепочечную ДНК именно в месте ее соединения с двухцепочечным участком, что указывает на то, что до того, как были сделаны разрезы, ДНК вокруг места повреждения была расплавлена, предположительно, под действием хеликазы (4).Эта активность обеспечивается, по крайней мере частично, TFIIH, одним из компонентов инициирующего комплекса РНК-полимеразы II (см. табл. 9.5). Сначала предполагалось, что TFIIH просто играет двойную роль в клетке, функционируя отдельно как при транскрипции, так и при репарации, но теперь считается, что существует более прямая связь между этими двумя процессами (Lehmann, 1995; Svejstrup et al ). ., 1996). Эта точка зрения подтверждается открытием репарации, связанной с транскрипцией, которая восстанавливает некоторые формы повреждений в матричных цепях генов, которые активно транскрибируются.Первым обнаруженным типом репарации, связанной с транскрипцией, была модифицированная версия эксцизионной репарации нуклеотидов, но теперь известно, что репарация с эксцизией оснований также связана с транскрипцией (Cooper et al. ., 1997). Эти открытия не означают, что нетранскрибируемые участки генома не репарируются. Процессы эксцизионной репарации защищают от повреждения весь геном, но вполне логично, что должны существовать специальные механизмы, направляющие процессы на транскрибируемые гены.Цепи-матрицы этих генов содержат биологическую информацию генома, и поддержание их целостности должно быть наивысшим приоритетом для систем репарации.

Рисунок 14.22

Схема событий, происходящих во время эксцизионной репарации нуклеотидов у эукариот. Эндонуклеазы, удаляющие поврежденный участок, делают надрезы именно в месте соединения одноцепочечных и двухцепочечных участков молекулы ДНК. Поэтому ДНК (подробнее…)

14.2.3. Репарация несоответствия: исправление ошибок репликации

Каждая из систем репарации, которые мы рассмотрели до сих пор, — прямая репарация, эксцизионная репарация и эксцизионная репарация нуклеотидов — распознают повреждения ДНК, вызванные мутагенами, и воздействуют на них.Это означает, что они ищут аномальные химические структуры, такие как модифицированные нуклеотиды, циклобутиловые димеры и внутрицепочечные сшивки. Однако они не могут исправить несовпадения, возникающие в результате ошибок репликации, потому что несовпадающий нуклеотид никоим образом не является аномальным, это просто A, C, G или T, которые были вставлены в неправильное положение. Поскольку эти нуклеотиды выглядят точно так же, как и любые другие нуклеотиды, система восстановления несоответствия, которая исправляет ошибки репликации, должна обнаруживать не сам несовпадающий нуклеотид, а отсутствие спаривания оснований между родительской и дочерней цепями.Обнаружив несоответствие, система репарации вырезает часть дочернего полинуклеотида и заполняет пробел, аналогично репарации путем эксцизии оснований и нуклеотидов.

Описанная выше схема оставляет без ответа один важный вопрос. Ремонт должен производиться в дочернем полинуклеотиде, потому что именно в этой вновь синтезированной цепи произошла ошибка; исходный полинуклеотид имеет правильную последовательность. Как процесс восстановления узнает, какая прядь какая? В Э.coli ответ состоит в том, что дочерняя цепь на этой стадии недостаточно метилирована и поэтому может быть отличена от исходного полинуклеотида, имеющего полный набор метильных групп. ДНК E. coli метилирована из-за активности ДНК-аденинметилазы ( Dam ), которая превращает аденины в 6-метиладенины в последовательности 5′-GATC-3′, и ДНК-цитозинметилазы ( Dcm ), который превращает цитозины в 5-метилцитозины в 5′-CCAGG-3′ и 5′-CCTGG-3′.Эти метилирования не являются мутагенными, модифицированные нуклеотиды имеют те же свойства спаривания оснований, что и немодифицированные версии. Существует задержка между репликацией ДНК и метилированием дочерней цепи, и именно в это время система репарации сканирует ДНК на наличие несоответствий и вносит необходимые исправления в недостаточно метилированную дочернюю цепь.

Рисунок 14.23

Метилирование вновь синтезированной ДНК в Escherichia coli не происходит сразу после репликации, что дает возможность белкам восстановления несоответствия распознавать дочерние цепи и исправлять ошибки репликации.

E. coli имеет по крайней мере три системы репарации несоответствия, называемые «длинный участок», «короткий участок» и «очень короткий участок», названия которых указывают на относительную длину вырезанных и ресинтезированных сегментов. Система длинных заплат заменяет до kb или более ДНК и требует белков MutH, MutL и MutS, а также геликазу II ДНК, которую мы встретили во время эксцизионной репарации нуклеотидов. MutS распознает несоответствие, а MutH различает две нити, связываясь с неметилированными последовательностями 5′-GATC-3′ (10).Роль MutL неясна, но он может координировать активность двух других белков, так что MutH связывается с последовательностями 5′-GATC-3′ только вблизи сайтов несоответствия, распознаваемых MutS. После связывания MutH разрезает фосфодиэфирную связь непосредственно перед G в последовательности метилирования, а ДНК-хеликаза II отщепляет одну цепь. По-видимому, не существует фермента, который разрезал бы цепь после несоответствия; вместо этого отсоединенная одноцепочечная область расщепляется экзонуклеазой, которая следует за геликазой и продолжается за пределами сайта несоответствия.Затем пробел заполняется ДНК-полимеразой I и ДНК-лигазой. Сходные события, как полагают, происходят во время короткой и очень короткой репарации несоответствия, разница заключается в специфичности белков, которые распознают несоответствие. Система короткой заплаты, которая приводит к вырезанию сегмента длиной менее 10 нуклеотидов, начинается, когда MutY распознает несоответствие AG или AC, а система очень короткой репарации исправляет несоответствие G-T, которое распознается эндонуклеазой Vsr.

Рис. 14.24

Исправление несовпадения длинных участков в Escherichia coli . См текст для деталей.

Эукариоты имеют гомологи белков E. coli Mut, и их процессы репарации несоответствия, вероятно, работают сходным образом (Kolodner, 2000). Единственное отличие состоит в том, что метилирование не может быть методом, используемым для различения родительских и дочерних полинуклеотидов. Метилирование участвует в репарации несоответствий в клетках млекопитающих, но ДНК некоторых эукариот, включая плодовых мух и дрожжей, не сильно метилирована; поэтому считается, что эти организмы должны использовать другой метод.Возможности включают ассоциацию между ферментами репарации и репликационным комплексом, так что репарация связана с синтезом ДНК, или использование одноцепочечных связывающих белков, которые маркируют родительскую цепь.

14.2.4. Репарация двухцепочечных разрывов ДНК

Одноцепочечный разрыв в двухцепочечной молекуле ДНК, например, возникающий в процессе эксцизионной репарации оснований и нуклеотидов, а также при некоторых типах окислительного повреждения, не представляет для клетки критического состояния. проблема.Двойная спираль сохраняет свою общую целостность, и разрыв может быть репарирован с помощью матрично-зависимого синтеза ДНК. Двухцепочечный разрыв более серьезен, потому что он превращает исходную двойную спираль в два отдельных фрагмента, которые необходимо снова собрать вместе, чтобы восстановить разрыв (2). Два разорванных конца должны быть защищены от дальнейшей деградации, которая может привести к появлению делеционных мутаций в точке репарированного разрыва. Процессы репарации также должны обеспечивать соединение правильных концов: если в ядре есть две сломанные хромосомы, то правильные пары должны быть сведены вместе, чтобы восстановить исходные структуры.Экспериментальные исследования клеток мышей показывают, что достичь такого результата сложно, и если две хромосомы сломаны, то неправильное восстановление, приводящее к гибридным структурам, происходит относительно часто (Richardson and Jasin, 2000). Даже если сломана только одна хромосома, все еще существует вероятность того, что естественный конец хромосомы можно спутать с разрывом и выполненным неправильным восстановлением. Этот тип ошибок известен, несмотря на наличие особых белков, связывающих теломеры, которые маркируют естественные концы хромосом (раздел 2.2.1).

Рис. 14.25

Ремонт одно- и двухнитевых разрывов. (A) Одноцепочечный разрыв не нарушает целостность двойной спирали. Открытая одиночная цепь покрыта белками PARP1, которые защищают эту неповрежденную цепь от разрыва и предотвращают ее участие (подробнее…)

Двухцепочечные разрывы образуются под воздействием ионизирующего излучения и некоторых химических мутагенов, а также клеткой контролируемым образом во время событий рекомбинации, таких как перестройки генома, которые соединяют сегменты гена иммуноглобулина и сегменты гена Т-клеточного рецептора в В- и Т-лимфоцитах (Раздел 12.2.1). Прогресс в понимании системы репарации разрывов был стимулирован исследованиями мутантных клеточных линий человека, которые привели к идентификации различных наборов генов, участвующих в этом процессе (Critchlow and Jackson, 1998). Эти гены определяют многокомпонентный белковый комплекс, который направляет ДНК-лигазу на разрыв (). Комплекс включает белок Ku, состоящий из двух неидентичных субъединиц, который связывает концы ДНК по обе стороны от разрыва (Walker et al. , 2001).Ku связывается с ДНК в ассоциации с протеинкиназой DNA-PK _CS , которая активирует третий белок, XRCC4, который взаимодействует с ДНК-лигазой IV млекопитающих, направляя этот белок репарации на двухцепочечный разрыв.

Рисунок 14.26

Негомологичное соединение концов (NHEJ) у человека. (А) Процесс ремонта. Дополнительные белки, не показанные на диаграмме, также участвуют в NHEJ. К ним относятся протеинкиназы ATM и ATR (раздел 13.3.2), основная роль которых может заключаться в том, чтобы сигнализировать клетке о (больше…)

Процесс восстановления называется негомологичным соединением концов ( NHEJ ), это название указывает на то, что нет необходимости в гомологии между двумя молекулами, чьи концы соединяются, в отличие от других механизмов соединения концов, которые мы встретимся при изучении рекомбинации в разделе 14. 3. NHEJ рассматривается как тип рекомбинации, потому что, помимо восстановления разрывов, его можно использовать для соединения молекул или фрагментов, которые ранее не были соединены, создавая новые комбинации.Вариант системы NHEJ, вероятно, используется при конструировании генов иммуноглобулинов и рецепторов Т-клеток, но детали, вероятно, будут отличаться, поскольку эти запрограммированные перестройки генома включают промежуточные структуры, такие как шпильки ДНК, которые не видны во время конструирования. восстановление разрывов ДНК в результате повреждения.

14.2.5. Обход повреждения ДНК во время репликации генома

Если область генома сильно повреждена, то вполне вероятно, что процессы восстановления будут перегружены.Затем клетка сталкивается с жестким выбором между смертью или попыткой репликации поврежденной области, даже если эта репликация может быть подвержена ошибкам и привести к мутировавшим дочерним молекулам. Столкнувшись с таким выбором, клетки E. coli неизменно выбирают второй вариант, вызывая одну из нескольких экстренных процедур для обхода мест серьезного повреждения. Наиболее изученным из этих обходных процессов является SOS-ответ, который позволяет клетке реплицировать свою ДНК, даже если матричные полинуклеотиды содержат AP-сайты и/или циклобутиловые димеры и другие фотопродукты, возникающие в результате воздействия химических мутагенов или УФ-излучения, которые обычно блокируют или, по крайней мере, задержка репликационного комплекса.Обход этих сайтов требует создания мутасомы, состоящей из комплекса UmuD’ ₂ C (также называемого ДНК-полимеразой V, тримера, состоящего из двух белков UmuD’ и одной копии UmuC) и нескольких копий белка RecA . (Гудман, 2000). Последний представляет собой одноцепочечный ДНК-связывающий белок, который покрывает поврежденные цепи, позволяя комплексу UmuD’ ₂ C вытеснять ДНК-полимеразу III и осуществлять подверженный ошибкам синтез ДНК до тех пор, пока поврежденный участок не будет пройден и ДНК-полимераза III может взять на себя еще раз ().

Рисунок 14.27

Реакция SOS Escherichia coli . См текст для деталей.

Реакция SOS в первую очередь рассматривается как последняя лучшая возможность для бактерии реплицировать свою ДНК и, следовательно, выжить в неблагоприятных условиях. Однако ценой выживания является повышенная частота мутаций, потому что мутасома не восстанавливает повреждения, а просто позволяет реплицироваться поврежденному участку полинуклеотида. Когда она сталкивается с поврежденным положением в матричной ДНК, полимераза выбирает нуклеотид более или менее случайным образом, хотя и с некоторым предпочтением для размещения А напротив АР-сайта: в результате частота ошибок в процессе репликации увеличивается.Было высказано предположение, что эта повышенная частота мутаций является целью SOS-реакции, поскольку мутация является в некотором роде благоприятной реакцией на повреждение ДНК, но эта идея остается спорной (Chicurel, 2001).

Некоторое время SOS-ответ считался единственным процессом обхода повреждения у бактерий, но теперь мы понимаем, что по крайней мере две другие полимеразы E. coli действуют аналогичным образом, хотя и с различными типами повреждений. Это ДНК-полимераза II, которая может обходить нуклеотиды, связанные с мутагенными химическими веществами, такими как N -2-ацетиламинофлуорен, и ДНК-полимераза IV (также называемая DinB), которая может реплицироваться через область матричной ДНК, в которой два родительских полинуклеотида имеют смещаются (Lindahl and Wood, 1999; Hanaoka, 2001).Обходные полимеразы также были обнаружены в эукариотических клетках. К ним относятся ДНК-полимераза η, которая может обходить циклобутиловые димеры (Johnson et al. ., 1999), и ДНК-полимеразы ι и ζ, которые работают вместе для репликации через фотопродукты и AP-сайты (Johnson et al. ., 2000).

14.2.6. Дефекты репарации ДНК лежат в основе болезней человека, включая рак

Важность репарации ДНК подчеркивается количеством и тяжестью наследственных заболеваний человека, связанных с дефектами одного из процессов репарации.Одним из наиболее охарактеризованных из них является пигментная ксеродерма, которая возникает в результате мутации в любом из нескольких генов белков, участвующих в эксцизионной репарации нуклеотидов. Иссечение нуклеотидов — единственный способ, с помощью которого человеческие клетки могут восстанавливать циклобутиловые димеры и другие фотопродукты, поэтому неудивительно, что симптомы пигментной ксеродермы включают повышенную чувствительность к УФ-излучению, пациенты страдают от большего количества мутаций, чем обычно, под воздействием солнечного света, что часто приводит к рак кожи (Lehmann, 1995).Трихотиодистрофия также вызывается дефектами эксцизионной репарации нуклеотидов, но это более сложное заболевание, которое, хотя и не связано с раком, обычно включает проблемы как с кожей, так и с нервной системой.

Некоторые заболевания связаны с дефектами связанного с транскрипцией компонента эксцизионной репарации нуклеотидов. К ним относятся рак молочной железы и яичников, ген BRCA1 , который придает предрасположенность к этим видам рака, кодирующий белок, который, по крайней мере косвенно, участвует в репарации, связанной с транскрипцией (Gowen et al ., 1998) и синдром Коккейна, сложное заболевание, проявляющееся ростовыми и неврологическими нарушениями (Hanawalt, 2000). Недостаточность связанной с транскрипцией репарации также была выявлена ​​у людей, страдающих синдромом предрасположенности к раку, называемым HNPCC (наследственный неполипозный колоректальный рак; Mellon et al. ., 1996), хотя первоначально это заболевание было идентифицировано как дефект в восстановление несоответствия (Колоднер, 1995). Атаксия-телеангиэктазия, симптомы которой включают чувствительность к ионизирующему излучению, возникает в результате дефектов в гене ATX , который участвует в процессе обнаружения повреждений (раздел 13.3.2). Другими заболеваниями, связанными с нарушением репарации ДНК, являются синдромы Блума и Вернера, которые вызываются инактивацией геликазы ДНК, которая может играть роль в NHEJ (Shen and Loeb, 2000; Wu and Hickson, 2001), и анемия Фанкони. , который придает чувствительность к химическим веществам, вызывающим перекрестные связи в ДНК, но биохимическая основа которых еще не известна.

14.3. Рекомбинация

Без рекомбинации геномы были бы относительно статичными структурами, претерпевающими очень мало изменений. Постепенное накопление мутаций в течение длительного времени привело бы к мелкомасштабным изменениям в нуклеотидной последовательности генома, но не произошло бы более обширной перестройки, в которой играет роль рекомбинация, и эволюционный потенциал генома был бы снижен. быть строго ограничены.

Рекомбинация была впервые признана как процесс, отвечающий за кроссинговер и обмен сегментами ДНК между гомологичными хромосомами во время мейоза эукариотических клеток (см. ), и впоследствии была вовлечена в интеграцию перенесенной ДНК в бактериальные геномы после конъюгации, трансдукции или трансформации (Раздел 5.2.4). Биологическое значение этих процессов стимулировало первые попытки описания молекулярных событий, участвующих в рекомбинации, и привело к модели Холлидея (Holliday, 1964), с которой мы начнем наше изучение рекомбинации.

14.3.1. Гомологическая рекомбинация

Модель Холлидея относится к типу рекомбинации, называемой вообще или гомологичной рекомбинации. Это наиболее важная версия рекомбинации в природе, отвечающая за мейотический кроссинговер и интеграцию перенесенной ДНК в бактериальные геномы.

Модель Холлидея для гомологичной рекомбинации

Модель Холлидея описывает рекомбинацию между двумя гомологичными двухцепочечными молекулами, молекулами с идентичными или почти идентичными последовательностями, но в равной степени применимыми к двум различным молекулам, которые имеют ограниченный участок гомологии, или к одному молекула, которая рекомбинирует сама с собой, поскольку содержит два отдельных участка, гомологичных друг другу.

Центральным элементом модели является образование гетеродуплекса в результате обмена полинуклеотидными сегментами между двумя гомологичными молекулами ().Первоначально гетеродуплекс стабилизируется за счет спаривания оснований между каждой перенесенной цепью и интактным полинуклеотидом молекулы-реципиента, причем такое спаривание оснований возможно из-за схожести последовательностей между двумя молекулами. Затем щели запечатываются ДНК-лигазой, что дает структуру Холлидея. Эта структура является динамической, миграция ветвей приводит к обмену более длинными сегментами ДНК, если две спирали вращаются в одном направлении.

Рисунок 14.28

Модель Холлидея для гомологичной рекомбинации.

Разделение или расщепление структуры Холлидея обратно на отдельные двухцепочечные молекулы происходит путем расщепления по точке ветвления. Это ключ ко всему процессу, потому что разрез может быть выполнен в любой из двух ориентаций, что становится очевидным при рассмотрении трехмерной конфигурации или формы ци структуры Холлидея (см. рис. 1). Эти два сокращения имеют очень разные результаты. Если сделать разрез влево-вправо поперек хи-формы, как показано на рис. , то все, что произойдет, это то, что короткий сегмент полинуклеотида, соответствующий расстоянию, пройденному ветвью структуры Холлидея, переместится между двумя молекулами.С другой стороны, разрез вверх-вниз приводит к взаимному обмену цепями, когда двухцепочечная ДНК переносится между двумя молекулами, так что конец одной молекулы заменяется на конец другой молекулы. Это перенос ДНК, наблюдаемый при кроссинговере.

До сих пор мы игнорировали один аспект модели Холлидея. Так взаимодействуют две двухцепочечные молекулы в начале процесса образования гетеродуплекса. В исходной схеме две молекулы выстраивались друг относительно друга, и одноцепочечные разрывы появлялись в эквивалентных положениях каждой спирали.Это приводило к образованию свободных одноцепочечных концов, которые можно было обменивать, что приводило к гетеродуплексу. Эта особенность модели подверглась критике, потому что нельзя было предложить механизм, гарантирующий, что разрывы будут происходить точно в одном и том же месте на каждой молекуле. Модификация Мезельсона-Раддинга (Meselson and Radding, 1975) предлагает более удовлетворительную схему, согласно которой одноцепочечный разрыв происходит только в одной из двойных спиралей, а образовавшийся свободный конец «вторгается» в неразорванную двойную спираль в гомологичном положении и смещая одну из своих нитей, образуя D-петлю (). Последующее расщепление смещенной нити на стыке ее одноцепочечной и парной областей приводит к образованию гетеродуплекса.

Рисунок 14.29

Две схемы инициации гомологичной рекомбинации. (A) Инициация, как описано в исходной модели гомологичной рекомбинации. (B) Модификация Мезельсона-Раддинга, которая предлагает более правдоподобную серию событий для образования гетеродуплекса. (подробнее…)

Белки, участвующие в гомологичной рекомбинации в

Модель Холлидея и модификация Мезельсона-Раддинга относятся к гомологичной рекомбинации во всех организмах, но, как и во многих областях молекулярной биологии, первоначальный прогресс в понимании того, как этот процесс осуществляется в клетке, был достигнут с E. coli . Исследуемая система специфической рекомбинации имеет кольцевой геном E. coli в качестве второго партнера и линейный фрагмент хромосомы в качестве второго партнера, что имеет место при конъюгации, трансдукции или трансформации бактериальных клеток (раздел 5. 2.4).

Исследования мутаций выявили ряд генов E. coli , которые при инактивации вызывают дефекты гомологичной рекомбинации, указывая на то, что их белковые продукты каким-то образом участвуют в этом процессе. Были описаны три различные системы рекомбинации, это пути RecBCD, RecE и RecF, причем RecBCD, по-видимому, является наиболее важным в бактериях (Camerini-Otero and Hsieh, 1995). В этом пути рекомбинация инициируется ферментом RecBCD, который обладает как нуклеазной, так и геликазной активностью.Его точный механизм действия неизвестен: в простейшей модели фермент связывается с одним концом линейной молекулы и раскручивает ее, пока не достигнет первой копии консенсусной последовательности из восьми нуклеотидов 5′-GCTGGTGG-3′ (которая довольно путано называется chi-сайт), который встречается один раз каждые 6 т.п.н. в ДНК E. coli (Blattner et al. ., 1997). Затем нуклеазная активность фермента создает одноцепочечный разрыв в положении примерно 56 нуклеотидов к 3′-стороне хи-сайта (). В альтернативных предложениях фермент RecBCD создает разрывы по мере продвижения вдоль линейной ДНК, причем эта активность ингибируется при достижении сайта chi, причем последний из этих прогрессирующих разрывов эквивалентен одиночному разрыву, предусмотренному в первой модели (Eggleston and West, 1996). ).

Рисунок 14.30

Путь RecBCD для гомологичной рекомбинации в Escherichia coli . Показаны события, приводящие к образованию гетеродуплекса. В нижней структуре нить ДНК, покрытая RecA, сформировала тройную структуру, которая считается промежуточной (более подробно)…)

Каким бы ни был точный механизм, фермент RecBCD производит свободный одноцепочечный конец, который, в соответствии с модификацией Мезельсона-Раддинга, вторгается в интактный партнер, в данном случае в кольцевой геном E. coli . Эта стадия опосредована белком RecA, который образует покрытую белком нить ДНК, способную внедряться в интактную двойную спираль и образовывать D-петлю (см. ). Промежуточным звеном в образовании D-петли, вероятно, является тройная структура, трехцепочечная спираль ДНК, в которой вторгшийся полинуклеотид лежит в пределах большой бороздки интактной спирали и образует водородные связи с парами оснований, с которыми он сталкивается (Camerini-Otero и Се, 1995).

Миграция ветвей катализируется белками RuvA и RuvB, оба из которых прикрепляются к точке ветвления структуры Холлидея. Рентгеноструктурные исследования предполагают, что четыре копии RuvA связываются непосредственно с ветвью, образуя ядро, к которому прикрепляются два кольца RuvB, каждое из которых состоит из восьми белков, по одному с каждой стороны (; Rafferty et al. ., 1996). Получившаяся структура могла бы действовать как «молекулярный двигатель», вращая спирали нужным образом, чтобы точка ветвления двигалась.Белок RecG также играет роль в миграции ветвей, но неясно, связано ли это с RuvAB или как часть альтернативного механизма (Eggleston and West, 1996).

Рисунок 14.

Роль белков Ruv в гомологичной рекомбинации у Escherichia coli. Миграция ветвей индуцируется структурой, состоящей из четырех копий RuvA, связанных с соединением Холлидея с кольцом RuvB с каждой стороны. После отсоединения RuvAB два RuvC (далее…)

Миграция ветки не выглядит случайным процессом, а вместо этого предпочтительно останавливается на последовательности

Модель двухцепочечного разрыва для рекомбинации у дрожжей

Хотя модель Холлидея для гомологичной рекомбинации, либо в ее исходной форме, либо в модификации Мезельсона и Раддинга, объясняет большинство результатов рекомбинации во всех организмах, она имеет несколько недостатков , что побудило к разработке альтернативных схем. В частности, считалось, что модель Холлидея не может объяснить конверсию генов — явление, впервые описанное у дрожжей и грибов, но теперь известное для многих эукариот. У дрожжей слияние пары гамет приводит к образованию зиготы, которая дает начало аску, содержащему четыре гаплоидные споры, генотипы которых можно определить индивидуально. Если гаметы имеют разные аллели в определенном локусе, то при нормальных обстоятельствах две споры будут демонстрировать один генотип, а две — другой генотип, но иногда эта ожидаемая схема сегрегации 2 : 2 заменяется неожиданным соотношением 3 : 1. .Это называется генной конверсией, потому что такое соотношение можно объяснить только «конверсией» одного из аллелей из одного типа в другой, предположительно путем рекомбинации во время мейоза, который происходит после слияния гамет.

Рисунок 14.32

Конверсия генов. Одна гамета содержит аллель A , а другая содержит аллель a . Они сливаются, образуя зиготу, которая дает начало четырем гаплоидным спорам, содержащимся в одной аске. В норме две споры будут иметь аллель A , а две — аллель (more…)

Модель двухцепочечного разрыва дает возможность генной конверсии происходить в процессе рекомбинации. Она начинается не с одноцепочечного разрыва, как в схеме Холлидея, а с двухцепочечного разреза, разрывающего одного из партнеров рекомбинации на две части (). Это может показаться радикальным шагом, но было показано, что белком, ответственным за разрез, является ДНК-топоизомераза типа II (раздел 13.1.2), которая образует ковалентные связи с двумя фрагментами ДНК и, следовательно, предотвращает их полный дрейф. отдельно.После двухцепочечного разреза одна цепь в каждой половине молекулы обрезается экзонуклеазой 5’→3′, поэтому каждый конец теперь имеет 3′-выступ примерно из 500 нуклеотидов. Один из них вторгается в гомологичную молекулу ДНК способом, подобным тому, который предусмотрен схемой Мезельсона-Раддинга, создавая соединение Холлидея, которое может мигрировать вдоль гетеродуплекса, если вторгающаяся цепь удлиняется ДНК-полимеразой. Для завершения гетеродуплекса также удлиняется другая оборванная нить (не участвующая в соединении Холлидея).Обратите внимание, что оба синтеза ДНК включают удлинение цепей от партнера, подвергшегося двухцепочечному разрезу, с использованием в качестве матриц эквивалентных областей неразрезанного партнера. Это лежит в основе генной конверсии, потому что это означает, что полинуклеотидные сегменты, удаленные экзонуклеазой от разрезанного партнера, были заменены копиями ДНК от неразрезанного партнера.

Рисунок 14.33

Модель двухцепочечного разрыва для рекомбинации в дрожжах. Эта модель объясняет, как может происходить конверсия генов.См текст для деталей.

Полученный гетеродуплекс имеет пару структур Холлидея, которые могут быть разрешены несколькими способами, некоторые из которых приводят к генной конверсии, а другие дают стандартный реципрокный обмен цепями. Пример, приводящий к конверсии генов, показан на рис.

Модель двухцепочечного разрыва была достаточно хорошо охарактеризована у дрожжей, чтобы можно было не сомневаться в том, что она происходит, по крайней мере, в форме, близкой к той, что показана на рис. Некоторые белки, участвующие в рекомбинации у дрожжей, очень похожи на свои аналоги в E.coli — эукариотический RAD51, например, имеет сходство последовательности с RecA и, как полагают, работает таким же образом (Baumann and West, 1998), что побуждает предположить, что рекомбинация во всех организмах происходит по системе двухцепочечного разрыва. Пока что имеется мало доказательств в поддержку этой идеи, особенно для более крупных хромосом высших эукариот, и многие генетики сопротивляются предположению, что ДНК позвоночных подвергается частым двухцепочечным разрывам во время мейоза.

Коробка 14.2

Пути рекомбинации RecE и RecF Escherichia coli . Пути RecBCD, RecE и RecF включают сходные механизмы и используют несколько одинаковых белков. RecA участвует в каждом пути, RecF является компонентом путей RecE и RecF, (подробнее…)

14.3.2. Сайт-специфическая рекомбинация

Наличие области обширной гомологии не является обязательным условием для рекомбинации: процесс может также инициироваться между двумя молекулами ДНК, которые имеют только очень короткие общие последовательности. Это называется сайт-специфической рекомбинацией, и она широко изучалась из-за роли, которую она играет во время инфекционного цикла бактериофага λ.

Интеграция ДНК λ в геном

Во время лизогенной фазы геном λ интегрируется в геном E.coli хромосома. Поэтому он реплицируется всякий раз, когда копируется ДНК E. coli , и таким образом передается дочерним клеткам, как если бы это была стандартная часть генома бактерии. Интеграция происходит путем сайт-специфической рекомбинации между сайтами и , одним на λ-геноме и одним на хромосоме E. coli , которые имеют в своем центре идентичную последовательность из 15 п.н. Поскольку это рекомбинация между двумя кольцевыми молекулами, в результате образуется один больший круг; другими словами, ДНК λ интегрируется в бактериальный геном.Вторая сайт-специфическая рекомбинация между двумя сайтами и , теперь оба содержащимися в одной молекуле, обращает исходный процесс и высвобождает λ-ДНК, которая теперь может вернуться к литическому способу заражения и прямому синтезу новых фагов.

Рисунок 14.34

Интеграция генома бактериофага λ в хромосомную ДНК Escherichia coli . И λ, и E. ДНК coli имеет копию сайта att , каждый из которых содержит идентичную центральную последовательность, называемую «O», и фланкирующие последовательности P (подробнее. ..)

Рекомбинация катализируется специализированной топоизомеразой I типа (раздел 13.1.2), называемой интегразой (Kwon et al ., 1997), членом разнообразного семейства рекомбиназ, присутствующих в бактериях, археях и дрожжах. . Фермент делает двухцепочечный разрез в шахматном порядке в эквивалентных положениях в λ- и бактериальных и сайтах. Затем два коротких одноцепочечных выступа обмениваются между молекулами ДНК, образуя соединение Холлидея, которое перемещает несколько пар оснований вдоль гетеродуплекса перед расщеплением.Это расщепление, при условии, что оно выполнено в соответствующей ориентации, разрешает структуру Холлидея таким образом, что λ-ДНК встраивается в геном E. coli . Аналогичный процесс лежит в основе эксцизии, которая также осуществляется интегразой, но в сочетании со вторым белком, «эксцизионазой», кодируемым геном λ xis . Если бы интеграза могла выполнять вырезание сама по себе, то она, вероятно, вырезала бы λ-ДНК, как только интегрировала ее.

14.3.3. Транспозиция

Транспозиция — это не тип рекомбинации, а процесс, использующий рекомбинацию, конечным результатом которого является перенос сегмента ДНК из одного положения генома в другое. Характерной чертой транспозиции является то, что к переносимому сегменту примыкает пара коротких прямых повторов (), которые, как мы увидим, образуются в процессе транспозиции.

Рисунок 14.35

Интегрированные мобильные элементы окружены короткими прямыми повторяющимися последовательностями.Этот конкретный транспозон окружен тетрануклеотидным повтором 5′-CTGG-3′. Другие транспозоны имеют другую последовательность прямых повторов.

В разделе 2.4.2 мы рассмотрели различные типы мобильных элементов, известных у эукариот и прокариот, и обнаружили, что их можно разделить на три категории на основе их механизма транспозиции ():

• Транспозоны ДНК, которые транспонируются репликативно, при этом исходный транспозон остается на месте, а новая копия появляется в другом месте генома;
• Транспозоны ДНК, которые транспонируются консервативно, при этом исходный транспозон перемещается в новое место путем вырезания и вставки;
• Ретроэлементы, все из которых транспонируются через промежуточную РНК.

Рисунок 14.36

Репликативная и консервативная транспозиция. Транспозоны ДНК используют либо репликативный, либо консервативный путь (некоторые могут использовать оба). Ретроэлементы транспонируются репликативно через промежуточную РНК.

Теперь мы рассмотрим события рекомбинации, ответственные за каждый из этих трех типов транспозиции.

Графа 14.3

Метилирование и транспозиция ДНК. Транспозиция может иметь пагубные последствия для генома. Эти эффекты выходят за рамки очевидного нарушения активности гена, которое произойдет, если мобильный элемент займет новое положение, лежащее в кодирующей области (подробнее…)

Репликативная и консервативная транспозиция ДНК-транспозонов

За прошедшие годы был предложен ряд моделей репликативной и консервативной транспозиции, но большинство из них представляют собой модификации схемы, первоначально описанной Шапиро (1979). Согласно этой модели, репликативная транспозиция бактериального элемента, такого как транспозон типа Tn3 или мобильный фаг (раздел 2. 4.2), инициируется одной или несколькими эндонуклеазами, которые делают одноцепочечные разрезы по обе стороны от транспозона и в целевой сайт, куда будет вставлена ​​новая копия элемента ().В месте-мишени два разреза разделены несколькими парами оснований, так что расщепленная двухцепочечная молекула имеет короткие выступающие 5′-концы.

Рисунок 14.37

Модель процесса, приводящего к репликативной и консервативной транспозиции. См текст для деталей.

Лигирование этих 5′-выступов со свободными 3′-концами по обе стороны от транспозона дает гибридную молекулу, в которой исходные две ДНК — та, что содержит транспозон, и та, которая содержит сайт-мишень — связаны друг с другом мобильным элементом в окружении пары структур, напоминающих вилки репликации.Синтез ДНК на этих вилках репликации копирует мобильный элемент и превращает первоначальный гибрид в коинтеграт, в котором две исходные ДНК все еще связаны. Гомологическая рекомбинация между двумя копиями транспозона разъединяет коинтеграт, отделяя исходную молекулу ДНК (с ее копией транспозона, все еще на месте) от молекулы-мишени, которая теперь содержит копию транспозона. Таким образом, произошла репликативная транспозиция.

Модификация только что описанного процесса изменяет способ транспозиции с репликативного на консервативный (см. ).Вместо синтеза ДНК гибридная структура преобразуется обратно в две отдельные молекулы ДНК, просто создавая дополнительные одноцепочечные разрывы по обе стороны от транспозона. Это вырезает транспозон из его исходной молекулы, оставляя его «вставленным» в ДНК-мишень.

Транспозиция ретроэлементов

С точки зрения человека наиболее важными ретроэлементами являются ретровирусы, которые включают вирусы иммунодефицита человека, вызывающие СПИД, и различные другие вирулентные типы.Большая часть того, что мы знаем о ретротранспозиции, относится именно к ретровирусам, хотя считается, что другие ретротранспозоны, такие как ретротранспозоны семейств Ty1 / copya и Ty3 / gypsy , транспонируются по сходным механизмам.

Первым этапом ретротранспозиции является синтез РНК-копии вставленного ретроэлемента (). Длинный концевой повтор (LTR) на 5′-конце элемента содержит последовательность ТАТА, которая действует как промотор для транскрипции РНК-полимеразой II (раздел 9.2.2). Некоторые ретроэлементы также имеют энхансерные последовательности (раздел 9.3), которые, как считается, регулируют количество происходящей транскрипции. Транскрипция продолжается по всей длине элемента, вплоть до последовательности полиаденилирования (раздел 10.1.2) в 3′-LTR. Транскрипт теперь действует как матрица для РНК-зависимого синтеза ДНК, катализируемого ферментом обратной транскриптазы, кодируемым частью гена pol ретроэлемента (см. ). Поскольку это синтез ДНК, требуется праймер (раздел 13.2.2), и, как и при репликации генома, праймер состоит из РНК, а не из ДНК. Во время репликации генома de novo праймер синтезируется ферментом полимеразой (см. ), но ретроэлементы не кодируют РНК-полимеразы и поэтому не могут создавать праймеры таким образом. Вместо этого они используют одну из молекул тРНК клетки в качестве праймера, которая зависит от ретроэлемента: семейство элементов Ty1 / copy всегда использует тРНК ^Met , но другие ретроэлементы используют другие тРНК.

Рисунок 14.38

Транспозиция ретроэлемента – часть 1. На этой диаграмме показано, как интегрированный ретроэлемент копируется в свободную двухцепочечную версию ДНК. Первым этапом является синтез копии РНК, которая затем преобразуется в двухцепочечную ДНК с помощью ряда событий (подробнее…)

Праймер тРНК отжигается в сайте в пределах 5′ LTR (см. ) На первый взгляд это кажется странным местом для сайта праймирования, потому что это означает, что синтез ДНК направлен в сторону от центральной области ретроэлемента и, таким образом, приводит только к короткой копии части 5′ LTR.На самом деле, когда копия ДНК удлиняется до конца LTR, часть матрицы РНК деградирует, и образовавшийся выступ ДНК повторно отжигается до 3′-LTR ретроэлемента, который, будучи длинным концом повтор имеет ту же последовательность, что и 5′ LTR, и поэтому может образовывать пару оснований с копией ДНК. Синтез ДНК теперь продолжается вдоль матрицы РНК, в конечном итоге вытесняя праймер тРНК. Обратите внимание, что результатом является ДНК-копия всего шаблона, включая сайт праймирования: переключение шаблона, по сути, является стратегией, которую ретроэлемент использует для решения проблемы «укорочения концов», той же проблемы, которую хромосомные ДНК решают посредством синтез теломер (раздел 13.2.4).

Завершение синтеза первой нити ДНК приводит к гибриду ДНК-РНК. РНК частично расщепляется ферментом РНКазой H, кодируемым другой частью гена pol . Нерасщепленная РНК, обычно всего лишь один фрагмент, присоединенный к короткой полипуриновой последовательности, примыкающей к 3′-концу LTR, инициирует синтез второй цепи ДНК, опять же с помощью обратной транскриптазы, которая способна действовать как РНК-, так и ДНК-транскриптаза. -зависимая ДНК-полимераза. Как и в первом раунде синтеза ДНК, синтез второй цепи первоначально приводит к копии ДНК только LTR, но второй переключатель матрицы на другом конце молекулы позволяет удлинить копию ДНК до тех пор, пока она не станет полной. .Это создает матрицу для дальнейшего удлинения первой цепи ДНК, так что полученная двухцепочечная ДНК представляет собой полную копию внутренней области ретроэлемента плюс два LTR.

Осталось только вставить новую копию ретроэлемента в геном. Первоначально считалось, что вставка происходит случайным образом, но теперь выяснилось, что, хотя в качестве сайта-мишени не используется какая-либо конкретная последовательность, интеграция происходит предпочтительно в определенных положениях (Devine and Boeke, 1996).Вставка включает удаление двух нуклеотидов с 3′-концов двухцепочечного ретроэлемента ферментом интегразой (кодируется еще одной частью pol ). Интеграза также делает ступенчатые разрезы в геномной ДНК, так что и ретроэлемент, и сайт интеграции теперь имеют 5′-выступы (10). Эти выступы могут не иметь комплементарных последовательностей, но они все же каким-то образом взаимодействуют, так что ретроэлемент вставляется в геномную ДНК. Взаимодействие приводит к потере выступов ретроэлемента и заполнению оставшихся пробелов, что означает, что сайт интеграции дублируется в пару прямых повторов, по одному на каждом конце вставленного ретроэлемента.

Рисунок 14.39

Транспозиция ретроэлемента — Часть 2. Интеграция ретроэлемента в геном приводит к прямому повтору из четырех нуклеотидов по обе стороны от вставленной последовательности. Для ретровирусов на этом этапе пути транспозиции требуется как интеграза (подробнее…)

Типы, категории, варианты, профессии и контрольные списки работ по техническому обслуживанию — Управление цепочками поставок | Динамика 365

• Статья
• 06.07.2021
• 19 минут на чтение

Пожалуйста, оцените свой опыт

да Нет

Любая дополнительная обратная связь?

Отзыв будет отправлен в Microsoft: при нажатии кнопки отправки ваш отзыв будет использован для улучшения продуктов и услуг Microsoft. Политика конфиденциальности.

Представлять на рассмотрение

Спасибо.

В этой статье

Тип актива привязан к каждому активу. Типы активов определяют типы работ по обслуживанию (и, следовательно, работы по обслуживанию), которые могут выполняться на активах. При создании рабочего задания необходимо выбрать тип задания обслуживания. Можно выбрать только те типы заданий обслуживания, которые связаны с настройкой типа актива, используемого для актива.

Графический обзор активов и типов заданий по обслуживанию, а также их связь с рабочими заданиями см. в разделе Функциональные местоположения и активы.

Варианты типа задания обслуживания можно настроить для типа задания обслуживания. Варианты типа задания обслуживания определяют варианты типа задания, такие как размеры (маленький, средний или большой), периоды (еженедельно, раз в две недели, один месяц или три месяца) и конфигурации (низкостандартная, гибкая или высокопроизводительная).

Профессии по техническому обслуживанию предоставляют информацию о профессиональных профессиях, таких как механика, электрика и гидравлика.Требования к компетенциям могут быть установлены в отношении работы по техническому обслуживанию. Все виды работ по техническому обслуживанию могут использоваться в отношении всех типов работ по техническому обслуживанию. Выбор варианта типа работы по техническому обслуживанию и/или обмена работами по техническому обслуживанию в рабочем задании является необязательным.

Для каждого типа задания обслуживания можно создать варианты настройки типа задания обслуживания. Например, если у вас есть тип задания по техническому обслуживанию с именем Сервис , вы можете создать следующие варианты для этого типа задания по техническому обслуживанию: Грузовые автомобили 30 000 км , Легковые автомобили 30 000 км и Фургоны 30 000 км .

Категории типов работ по техобслуживанию используются для сбора группы типов работ по техобслуживанию в обзорных целях. Примеры категорий типов работ по техническому обслуживанию могут включать Калибровка , Осмотр , Капитальный ремонт и Контрольно-измерительные приборы .

Шаблоны контрольных списков обслуживания и переменные контрольных списков обслуживания используются для настройки контрольных списков обслуживания. Контрольные списки обслуживания настраиваются для типов работ по обслуживанию и используются в рабочих заданиях.

Сначала вы устанавливаете требуемые категории типов работ по техническому обслуживанию, варианты типов работ по техническому обслуживанию и обмены работами по техническому обслуживанию. Затем вы создаете типы заданий обслуживания. Наконец, на странице Тип задания обслуживания по умолчанию вы создаете все варианты типов заданий обслуживания, которые требуются для вашего оборудования. На этой странице вы также можете настроить прогнозы, контрольные списки обслуживания и инструменты для комбинации типов работ по обслуживанию.

Примечание

Тип задания обслуживания может быть связан только с одной категорией типа задания обслуживания.

Создать категорию типа задания обслуживания

1. Выберите Управление активами > Настройка > Задания > Категории типов заданий обслуживания .

2. Выберите Новый .

3. В поле Тип задания обслуживания введите идентификатор категории типа задания обслуживания.

4. В поле Имя введите имя.

   После связывания категорий типов работ по обслуживанию с типами работ по обслуживанию в поле Типы работ отображается количество типов работ по обслуживанию, связанных с этой категорией типов работ по обслуживанию.

Создать вариант типа задания обслуживания

1. Выберите Управление активами > Настройка > Задания > Варианты типов заданий обслуживания .

2. Выберите Новый .

3. В поле Вариант типа задания обслуживания введите идентификатор варианта типа задания обслуживания.

4. В поле Описание введите описание.

5. На экспресс-вкладке Типы заданий обслуживания выберите Добавить , чтобы добавить тип задания обслуживания.

6. В поле Тип задания обслуживания выберите тип задания обслуживания.

7. Повторите шаги с 5 по 6, чтобы добавить дополнительные типы заданий обслуживания в вариант типа задания обслуживания.

   На экспресс-вкладке Подробности поле Типы заданий показывает количество типов заданий обслуживания, которые были добавлены к этому варианту типа задания обслуживания.

Создать сделку по ремонту

1. Выберите Управление активами > Настройка > Работа > Торговля ремонтными работами .

2. Выберите Новый .

3. В поле Сделка введите идентификатор сделки по ремонту.

4. В поле Описание введите описание.

5. На экспресс-вкладке Навыки выберите Добавить , чтобы добавить новый навык, который должен быть связан с работой по техническому обслуживанию.

6. В поле Навык выберите навык.

7. В поле Уровень выберите уровень навыка.

8. Повторите шаги с 5 по 7, чтобы добавить больше навыков в работу по техническому обслуживанию.

   На экспресс-вкладке Details поле Skills показывает количество навыков, которые были добавлены к этой профессии обслуживания.

9. На экспресс-вкладке Сертификаты выберите Добавить , чтобы добавить сертификат в сделку по обслуживанию.

10. В поле Тип сертификата выберите сертификат.

11. Повторите шаги с 9 по 10, чтобы добавить дополнительные сертификаты в обмен на обслуживание.

    На экспресс-вкладке Подробности поле Сертификаты показывает количество сертификатов, которые были добавлены к этой сделке по обслуживанию.

Создать переменную контрольного списка обслуживания

При создании строк контрольного списка обслуживания в типе задания обслуживания по умолчанию необходимо выбрать тип контрольного списка обслуживания. Переменная — это один из типов контрольного списка технического обслуживания. Он используется для определения возможного результата в строке контрольного списка обслуживания, которая связана со строкой заказа на работу. Переменная позволяет вам создать набор предопределенных результатов без необходимости точного измерения.

Пример 1: Уровень масла можно измерить, задав три значения: Слишком высокий уровень , Слишком низкий уровень и Уровень в пределах диапазона . Для каждого значения вы определяете, будет ли результатом значения Pass , Fail или None .

Пример 2: Вы проводите визуальный осмотр оборудования для оценки износа.

1. Выберите Управление активами > Настройка > Контрольные списки обслуживания > Переменные контрольного списка обслуживания .

2. Выберите Новый .

3. В поле Переменная введите идентификатор переменной контрольного списка обслуживания.

4. В поле Имя введите имя.

5. На экспресс-вкладке Общие выберите Добавить , чтобы добавить строку для переменной.

   Порядковый номер строки автоматически вводится в поле Номер строки . После того, как вы добавили все строки, вы можете изменить их номера по своему усмотрению. Когда вы выбираете строку, а затем нажимаете клавишу со стрелкой вниз , следующий номер в последовательности автоматически вводится в следующей строке.

6. В поле Значение введите описание значения.

7. В поле Результат выберите результат для строки.

Создайте шаблон контрольного списка обслуживания

можно использовать в качестве общего набора задач, которые работник должен выполнить для правильного выполнения заказа на работу. Ссылка на шаблоны содержится в строках контрольного списка обслуживания в типе задания обслуживания по умолчанию. На шаблоны можно ссылаться в нескольких строках по умолчанию типа задания обслуживания.Таким образом, вы можете легко повторно использовать набор общих задач контрольного списка обслуживания. Примеры шаблонов контрольных списков технического обслуживания включают общие инструкции по технике безопасности, а также список элементов и условий, которые необходимо проверить на конкретном насосе или аналогичных моделях конвейерной ленты.

1. Выберите Управление активами > Настройка > Контрольные списки обслуживания > Шаблоны контрольных списков обслуживания .

2. Выберите Новый .

   Идентификатор шаблона автоматически вводится в поле шаблона контрольного списка обслуживания .

3. В поле Имя введите имя шаблона контрольного списка обслуживания.

4. На экспресс-вкладке Строки контрольного списка обслуживания выберите Добавить , чтобы добавить строку шаблона.

   Порядковый номер строки автоматически вводится в поле Номер строки . После того, как вы добавили все строки, вы можете изменить их номера по своему усмотрению.Когда вы выбираете строку, а затем нажимаете клавишу со стрелкой вниз , следующий номер в последовательности автоматически вводится в следующей строке.

5. В поле Тип выберите тип строки контрольного списка обслуживания. Для каждого типа контрольного списка обслуживания на экспресс-вкладке Сведения о строке отображаются связанные поля. Доступны следующие значения:

   • Текст — В строке есть текст, описывающий, что делать. Используйте этот тип контрольного списка обслуживания, если вы хотите, чтобы работник что-то проверил или осмотрел, но вы не ожидаете конкретного (измеримого) результата.После выбора этого типа введите имя или заголовок в поле Имя . В поле Инструкции введите описание того, что необходимо сделать. Если шаг является обязательным для контрольного списка обслуживания, установите для параметра Обязательный значение Да .

   • Заголовок — строка используется в качестве заголовка для группировки строк контрольного списка обслуживания, которые отображаются под ней. Этот тип полезен, если у вас есть несколько строк контрольного списка обслуживания, которые можно разделить на определенные области.Заголовки предоставляют обзор для работника, который заполнит контрольный список обслуживания, содержащий много строк контрольного списка обслуживания. После выбора этого типа введите описательное имя в поле Имя .

   • Шаблон – Строка используется для ссылки на существующий шаблон. После выбора этого типа введите имя шаблона в поле Имя . В поле Шаблон выберите шаблон.

   • Переменная – Строка используется для определения возможного результата в диапазоне.Сведения о настройке переменных контрольного списка обслуживания см. в разделе Создание переменной контрольного списка обслуживания. После выбора этого типа введите описательное имя переменной в поле Имя . В поле Переменная выберите переменную. В поле Инструкции введите описание того, что необходимо сделать. Если шаг является обязательным для контрольного списка обслуживания, установите для параметра Обязательный значение Да .

   • Измерение – Линия используется для записи определенного измерения.Вы можете настроить измерение, которое должно быть связано с предопределенным счетчиком. После выбора этого типа введите имя шаблона в поле Имя . Если этот шаг является обязательным для контрольного списка обслуживания, установите для параметра Обязательный значение Да . Если вы хотите использовать линию измерения в качестве регистрации счетчика, выберите счетчик в поле Счетчик . Затем соответствующее поле Unit автоматически обновляется. Если вы выбрали счетчик, выберите метод обновления в поле Value .В мин. значение и Макс. значение полей, введите допустимый диапазон значений. В поле Инструкции введите описание того, что необходимо сделать.

     Примечание

     Любая строка типа Измерение , не имеющая настройки счетчика, рассматривается как независимая регистрация измерения, для которой нет автоматического отслеживания в Управлении активами. Аналогичным образом, если выбранный тип счетчика отсутствует в активе, связанном с рабочим заданием, задача контрольного списка обслуживания рассматривается как независимое измерение.Значение счетчика может быть изменено несколько раз. Он не публикуется до тех пор, пока состояние жизненного цикла заказа на работу не будет изменено на состояние, в котором для параметра Контрольный список обслуживания процесса установлено значение Да .

   На экспресс-вкладке Подробности поле Проверки показывает общее количество строк контрольного списка в вашем шаблоне. Это число включает вложенные строки в любом существующем шаблоне, на который вы ссылаетесь в своем шаблоне.

1. Выберите Управление активами > Настройка > Задания > Тип задания обслуживания по умолчанию .

   –или–

   Выберите Управление активами > Настройка > Задания > Типы заданий обслуживания , выберите тип задания обслуживания, а затем выберите Тип задания обслуживания по умолчанию .

2. Выберите Новый .

3. В полях Техническое место , Тип актива , Изготовитель , Модель и Актив выберите соответствующие значения в зависимости от того, насколько конкретным должен быть тип задания обслуживания по умолчанию.

4. В поле Тип задания обслуживания выберите тип задания обслуживания, если он не был выбран автоматически.

5. В полях Тип работы по техническому обслуживанию вариант и Торговля выберите нужный вариант типа работы по техническому обслуживанию и сделку по обслуживанию.

6. Выберите Прогноз .

7. На странице прогноза по умолчанию типа задания технического обслуживания можно делать прогнозы по часам, номенклатурам и расходам.На соответствующих вкладках выберите Добавить и сделайте выбор, чтобы создать необходимые прогнозы для типа задания обслуживания.

8. На вкладке Прогноз номенклатуры можно выбрать складские аналитики, которые должны отображаться в строке номенклатуры. Выберите Инвентаризация > Измерения , выберите размеры для отображения, установите для параметра Сохранить настройку значение Да , а затем выберите OK .

9. На вкладке Прогноз элемента выберите Элемент, где использовался , чтобы просмотреть обзор того, где элемент в выбранной строке используется в Управлении активами в отношении активов, типов работ по обслуживанию по умолчанию, запасных частей и рабочих заданий.

   Экспресс-вкладка Итоги прогноза обслуживания показывает обзор итогов прогноза. Этот обзор включает общее количество часов и созданных строк прогноза.

   Примечание

   Чтобы скопировать настройку прогноза из другого типа задания обслуживания, выберите Копировать прогноз , а затем выберите тип задания обслуживания, из которого нужно скопировать настройку.

10. Выберите Сохранить , чтобы сохранить изменения.

11. Закройте страницу прогноза по умолчанию для типа задания обслуживания , чтобы вернуться на страницу по умолчанию для типа задания обслуживания .

12. Выберите Контрольный список технического обслуживания .

13. На странице Контрольный список по умолчанию для типа задания обслуживания можно добавить строки контрольного списка обслуживания к выбранному типу задания обслуживания по умолчанию. На экспресс-вкладке Строки проверки обслуживания выберите Новый , чтобы добавить строку контрольного списка обслуживания.

    Номера строк

    автоматически вводятся в поле Номер строки , чтобы указать последовательность строк контрольного списка обслуживания.Вы можете редактировать номера строк по своему усмотрению. После создания первой строки контрольного списка обслуживания выберите строку, а затем нажмите клавишу со стрелкой вниз , чтобы добавить строку под ней. Кроме того, вы можете выбрать строку контрольного списка обслуживания, а затем выбрать New . В этом случае над выбранной строкой контрольного списка обслуживания добавляется новая строка.

14. В поле Тип выберите тип строки, а затем добавьте информацию, связанную с типом контрольного списка обслуживания.Описание доступных типов и связанных полей см. в разделе Создание шаблона контрольного списка обслуживания.

    Примечание

    Чтобы скопировать настройку контрольного списка обслуживания из другого типа задания обслуживания, выберите Копировать контрольный список обслуживания , а затем выберите тип задания обслуживания, из которого необходимо скопировать настройку.

    Вы можете легко создать шаблон из существующего контрольного списка обслуживания. Затем вы можете повторно использовать шаблон в нескольких контрольных списках обслуживания. Новый шаблон будет точной копией действующего контрольного списка обслуживания.Выберите Создать шаблон и введите имя шаблона. Чтобы заменить существующий контрольный список обслуживания одной строкой со ссылкой на новый шаблон, установите для параметра Заменить значение Да . Содержимое шаблона можно просмотреть на странице сведений о шаблонах контрольных списков обслуживания .

15. Выберите Сохранить , чтобы сохранить изменения.

16. Вернуться на страницу типа задания обслуживания по умолчанию .

17. Выберите Инструменты .

18. На странице инструментов по умолчанию для типа задания обслуживания можно добавить инструменты (ресурсы), которые следует использовать для типа задания обслуживания. Выберите New , а затем выберите инструмент в поле Resource .

    Примечание

    Чтобы скопировать настройку инструмента из другого типа задания обслуживания, выберите Инструменты копирования , а затем выберите тип задания обслуживания, из которого нужно скопировать настройку.

19. Выберите Сохранить , чтобы сохранить изменения.

20. Вернуться на страницу типа задания обслуживания по умолчанию .

21. Выберите Описание работы .

22. На странице Описание работы выберите Изменить , а затем добавьте описание, связанное с выбранным типом задания обслуживания по умолчанию, как вам нужно.

23. Выберите Сохранить , чтобы сохранить описание.

    Если вы добавите сюда описание работы, оно переопределит любое описание, настроенное для типа задания обслуживания на странице Типы заданий обслуживания . Если вы не добавите здесь описание работы, будет использоваться любое описание, настроенное для типа задания обслуживания. Описания автоматически переносятся в заказы на работу, в которых используется тип задания обслуживания или тип задания обслуживания по умолчанию.

24. Вернуться на страницу типа задания обслуживания по умолчанию .

25. Чтобы настроить вложения в строке по умолчанию для выбранного типа задания на обслуживание, выберите Прикрепить документы . Вложения, настроенные в строке по умолчанию для типа задания обслуживания, автоматически включаются в строки рабочих заданий, в которых используется строка по умолчанию для этого типа задания обслуживания.

26. Выберите Новый , а затем выберите тип документа.

27. Загрузите документ или файл.

28. Задайте поля на странице Приложения .Настройка вложения использует стандартные функции настройки документа.

29. Выберите Сохранить , чтобы сохранить вложение.

    Примечание

    Вложения в строке по умолчанию типа задания на обслуживание печатаются вместе с отчетом о рабочем задании, только если типы документов вложений выбраны на вкладке Типы документов на странице Параметры управления активами ( Управление активами > Настройка > Параметры управления активами ).Примеры вложений включают рекомендации, поясняющие, как выполнить определенное задание, или предопределенный контрольный список обслуживания (если вы не используете функцию контрольного списка обслуживания для строк по умолчанию типа задания обслуживания).

    На странице Тип задания обслуживания по умолчанию каждая строка показывает количество прогнозируемых часов, а также количество строк, созданных для элементов, расходов, контрольных списков обслуживания и инструментов. Поле Assets показывает количество активных активов, связанных со строкой по умолчанию типа задания обслуживания.

30. Чтобы скопировать тип задания обслуживания по умолчанию в другой тип задания обслуживания по умолчанию, выберите строку по умолчанию типа задания обслуживания, чтобы скопировать другую настройку, выберите Копировать настройку , а затем выберите тип задания обслуживания по умолчанию для копирования.

31. Чтобы просмотреть список активов, планов обслуживания или циклов обслуживания, которые в настоящее время используют строку по умолчанию типа задания обслуживания, выберите строку, а затем выберите Используется .

Когда система выбирает доступный тип задания по обслуживанию по умолчанию, который следует использовать в строке заказа на работу, выбор основывается на активе и настройке связанного типа актива.Управление активами просматривает все записи по умолчанию для типов работ по обслуживанию, которые связаны с типом работ по обслуживанию, связанным с типом активов, чтобы проверить возможное совпадение. Он всегда сначала проверяет наиболее конкретную комбинацию. Другими словами, чтобы найти наиболее конкретную комбинацию, Управление активами сначала проверяет возможное совпадение для поля Trade . Если совпадений не найдено, проверяется совпадение для поля варианта задания типа обслуживания . Если совпадений не найдено, он проверяет соответствие для поля Тип задания по техническому обслуживанию и т. д. ( Торговля , затем Вариант задания по техническому обслуживанию , затем Тип задания по техническому обслуживанию , затем Актив , затем Модель , затем Производитель , а затем Тип актива ).Если совпадений не найдено, используется запись по умолчанию, в которой выбран только тип задания обслуживания.

Идентификатор действия проекта автоматически связывается с каждой строкой по умолчанию типа задания обслуживания, которую вы создаете. Деятельность по проекту создается в прогнозируемом проекте, выбранном в поле Проект прогноза технического обслуживания на вкладке Активы на странице Параметры управления активами . Целью проектной деятельности является управление прогнозами по часам, предметам и расходам в отношении рабочих заданий.Прогнозы типа задания обслуживания автоматически переносятся в строку заказа на работу и копируются из проекта прогноза в проект заказа на работу, созданный для строки заказа на работу. Целью проектной деятельности является управление прогнозами в отношении рабочих заданий.

Можно настроить пакетное задание для обновления ссылок по умолчанию для типа задания обслуживания через регулярные промежутки времени или запустить задание вручную. Чтобы создать пакетное задание или выполнить обновление вручную, выберите Управление активами > Периодическое > Профилактическое обслуживание > Обновление ссылок по умолчанию для типа задания обслуживания .

Обзор типов работ по техническому обслуживанию, связанных с активами

После создания требуемых комбинаций типов заданий обслуживания по умолчанию можно использовать страницу Все активы , чтобы получить обзор текущего типа задания обслуживания по умолчанию, связанного с конкретным активом. В обзоре показаны все комбинации типов заданий обслуживания по умолчанию, которые можно использовать для типа актива, выбранного для актива. Эти комбинации включают в себя комбинации, которые имеют вариации вариантов типов работ по техническому обслуживанию и сделок по техническому обслуживанию.

1. Выбрать Управление активами > Общий > Активы > Все активы или Активные активы .

2. В списке выберите актив, чтобы просмотреть обзор комбинаций типов работ по обслуживанию.

3. В области действий на вкладке Общие в группе Сопутствующая информация выберите Типы заданий обслуживания .

   На левой панели страницы Типы заданий обслуживания активов отображается список всех комбинаций типов заданий обслуживания, связанных с выбранным активом.

4. Выберите комбинацию типов заданий по обслуживанию, чтобы просмотреть соответствующие настройки для контрольных списков обслуживания, прогнозов и инструментов. В разделе Подробности на экспресс-вкладке Тип задания обслуживания по умолчанию отображается количество связанных контрольных списков обслуживания, прогнозируемых часов, элементов и т. д., связанных с выбранной комбинацией типов заданий обслуживания.

5. Чтобы просмотреть сведения о выбранном типе заданий обслуживания, выберите Типы заданий обслуживания .

Автоматическое обновление прогнозов типов работ по техническому обслуживанию

В модуле «Управление активами» можно автоматически обновлять любые изменения в прогнозах типов работ по техническому обслуживанию для часовых затрат, стоимости номенклатур и расходов, которые были обновлены в других модулях.