Осп ф1: OSB (ОСП) Basic 9мм 1220х2440мм | Цена за лист — от 380,00 рублей
ГОСТ 32567-2013 Плиты древесные с ориентированной стружкой. Технические условия, ГОСТ от 22 ноября 2013 года №32567-2013
ГОСТ 32567-2013
ОКС 79.060.20
Дата введения 2014-07-01
Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Автономной некоммерческой организацией Центр по сертификации лесопродукции «ЛЕССЕРТИКА» (АНО ЦСЛ «ЛЕССЕРТИКА»), Закрытым акционерным обществом «Консультационная фирма «Проектирование, инвестиции, консалтинг» (ЗАО «Консультационная фирма «ПИК»), Обществом с ограниченной ответственностью «Кроношпан» (ООО «Кроношпан»), Обществом с ограниченной ответственностью «Кроностар» (ООО «Кроностар»), Обществом с ограниченной ответственностью «ОРИС» (ООО «ОРИС») и Обществом с ограниченной ответственностью «ДОК «Калевала» (ООО «ДОК «Калевала»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 44-2013 от 14 ноября 2013 г.)
За принятие стандарта проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
4 В настоящем стандарте учтены основные нормативные положения европейского стандарта EN 300:2006* «Oriented Strand Boards (OSB) — Definitions, classification and specifications», NEQ» (Плиты сориентированной стружкой (ОСП). Определения, классификация и технические условия)
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. — Примечание изготовителя базы данных.
5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1809-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32567-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 г.
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на древесные плиты, изготовленные методом горячего прессования древесной стружки, ориентированной горизонтально в пласти плиты, смешанной со связующим (далее — плиты), используемые в промышленности, в строительстве (включая жилые и общественные здания), для производства мебели и упаковки.
Стандарт не распространяется на плиты с облицованной и окрашенной поверхностью.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.2.003-91 Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.3.042-88 Система стандартов безопасности труда. Деревообрабатывающее производство. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 12.4.011-89 Система стандартов безопасности труда. Средства защиты работающих. Общие требования и классификация
ГОСТ 17.2.3.02-78 Охрана природы. Атмосфера. Правила установления допустимых выбросов вредных веществ промышленными предприятиями
ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия
ГОСТ 6507-90 Микрометры. Технические условия
ГОСТ 7502-98 Рулетки измерительные металлические. Технические условия
ГОСТ 8026-92 Линейки поверочные. Технические условия
ГОСТ 10633-78 Плиты древесностружечные. Общие правила подготовки и проведения физико-механических испытаний
ГОСТ 10634-88 Плиты древесностружечные. Методы определения физических свойств
ГОСТ 10635-88 Плиты древесностружечные. Методы определения предела прочности и модуля упругости при изгибе
ГОСТ 10636-90 Плиты древесностружечные. Метод определения предела прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 14192-96 Маркировка грузов
ГОСТ 18321-73 Статистический контроль качества. Методы случайного отбора выборок штучной продукции
ГОСТ 21650-76 Средства скрепления тарно-штучных грузов в транспортных пакетах. Общие требования
ГОСТ 24597-81 Пакеты тарно-штучных грузов. Основные параметры и размеры
ГОСТ 26663-85 Пакеты транспортные. Формирование с применением средств пакетирования. Общие технические требования
ГОСТ 27678-88 Плиты древесностружечные и фанера. Перфораторный метод определения содержания формальдегида
ГОСТ 27680-88 Плиты древесностружечные и древесноволокнистые. Методы контроля размеров и формы
ГОСТ 27935-88 Плиты древесноволокнистые и древесностружечные. Термины и определения
ГОСТ 30255-95 Мебель, древесные и полимерные материалы. Метод определения выделения формальдегида и других вредных летучих химических веществ в климатических камерах
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 плиты с ориентированной стружкой; ОСП (oriented strand boards; OSB): Листовой материал, изготовленный из склеенной между собой древесной стружки определенной формы, ориентированной в наружных слоях, преимущественно, параллельно ее длине или ширине, а во внутреннем слое перпендикулярно ее направлению или расположенной произвольно.
3.2 древесная стружка определенной формы (strand): Древесные частицы длиной более 50 мм и толщиной менее 2 мм, полученные в результате измельчения древесного сырья на специальном оборудовании и предназначенные для дальнейшей промышленной переработки.
3.3 главная ось плиты (major axis): Направление в плоскости плиты, совпадающее с ориентацией древесной стружки в наружных слоях плиты, в котором предел прочности и модуль упругости при изгибе имеют наибольшее значение.
3.4 второстепенная ось плиты (minor axis): Направление в плоскости плиты перпендикулярное по отношению к главной оси.
3.5 сухие условия применения плит (dry conditions): Условия, которые характеризуются влажностью материала, приведенной к температуре воздуха 20 °С и относительной влажности окружающего воздуха, превышающей значение 65% только в течение нескольких недель в году.
3.6 влажные условия (humid conditions): Условия, которые характеризуются влажностью материала, приведенной к температуре воздуха 20 °С и относительной влажности окружающего воздуха, превышающей значение 85% только в течение нескольких недель в году.
3.7 плиты, несущие нагрузку (load-bearing boards), плиты, несущие повышенную нагрузку (heavy duty load-bearing boards): Плиты, имеющие физико-механические показатели, позволяющие использовать их в несущих конструкциях, элементов зданий, а также в иных объектах с повышенной нагрузкой.
3.8 влагостойкость плит (moisture resistance): Степень сопротивления разрушению материала плиты под воздействием воды.
4 Размеры и классификация
4.1 Номинальные размеры плиты и предельные отклонения размеров указаны в таблице 1.
Таблица 1
мм
Размер плиты | Значение | Предельное отклонение |
Толщина | От 6,0 и более с градацией 1,0 | ±0,3 ±0,8 |
Длина, ширина | От 1200 и более с градацией 10 | ±3,0 |
Примечания: 1 По согласованию изготовителя с потребителем допускается выпускать плиты другой длины и ширины, не установленные в настоящей таблице. 2 Предельные отклонения размеров указаны для плит с влажностью, соответствующей влагосодержанию материала в условиях относительной влажности воздуха 65±5% и температуре 20±2 °С. |
4.2 Классификация
4.2.1 Плиты по степени обработки поверхности разделяют на нешлифованные (НШ) и шлифованные (Ш).
4.2.2 По применению в зависимости от физико-механических показателей плиты разделяют на четыре типа:
— ОСП-1 — плиты, не несущие нагрузку, предназначенные для применения внутри помещения в сухих условиях;
— ОСП-2 — плиты, несущие нагрузку, предназначенные для использования в сухих условиях;
— ОСП-3 — плиты, несущие нагрузку, предназначенные для использования во влажных условиях;
— ОСП-4 — плиты, несущие повышенную нагрузку, предназначенные для использования во влажных условиях.
4.2.3 В зависимости от содержания формальдегида в плите, выделения формальдегида в воздух плиты подразделяют на три класса эмиссии формальдегида — Е0.5, Е1 и Е2.
4.2.4 Условное обозначение плит должно включать:
— обозначение типа;
— степень обработки поверхности;
— класс эмиссии формальдегида;
— номинальные длину, ширину, толщину в миллиметрах;
— обозначение настоящего стандарта.
Примеры условных обозначений:
Плита типа ОСП-3, шлифованная, класса эмиссии Е1, размеры 2500x1250x12 мм:
ОСП-3, Ш, Е1, 2500x1250x12, ГОСТ
Плита типа ОСП-1, нешлифованная, класса эмиссии Е2, размеры 2800x1500x16 мм:
ОСП-1, НШ, Е2, 2800x1500x16, ГОСТ
Плиты должны изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим документам на конкретные плиты (группы плит).
5 Технические требования
5.1 Отклонение от прямолинейности кромок всех типов плит не должно быть более 1,5 мм на 1 м длины кромки.
5.2 Отклонение от перпендикулярности кромок всех типов плит не должно быть более 2,0 мм на 1 м длины кромки. Перпендикулярность кромок, определяемая разностью диагоналей пласти, не должна быть более 0,2% длины плиты.
5.3 Абсолютная влажность всех типов плит должна быть в пределах от 2% () до 12% ().
и — соответственно нижний и верхний пределы показателей.
5.4 Предельное отклонение плотности в пределах плиты не должно быть более ±15% для всех типов плит. Номинальное значение плотности плиты устанавливает изготовитель в технологической документации на конкретные плиты (группы плит).
5.5 Нормы ограничения дефектов на поверхности плит в зависимости от степени ее обработки указаны в таблице 2.
Таблица 2
Наименование дефекта | Норма ограничения дефекта для плит | |
шлифованных | нешлифованных | |
Сколы кромок и выкрашивание углов по ГОСТ 27935 | Допускаются единичные дефекты в пласти плиты глубиной до 5 мм (вкл.) и по длине кромки до 15 мм (вкл.) | |
Дефекты шлифования: | ||
— линейные следы от шлифования, | Не допускаются | Не нормируются |
— недошлифовка по ГОСТ 27935, | ||
— прошлифовка по ГОСТ 27935, | ||
— волнистость поверхности по ГОСТ 27935 | ||
Посторонние включения по ГОСТ 27935, расслоения по ГОСТ 27935, пузыри | Не допускаются | |
Примечания 1 Допускаются на пласти плиты ненормируемые включения коры и стружки различной цветности. 2 Шлифованные плиты с дефектами шлифования, указанными в таблице 2, переводят в нешлифованные. |
5.6 Физико-механические показатели плит типа ОСП-1 должны соответствовать нормам, указанным в таблице 3.
Таблица 3
Наименование показателя | Норма для плит номинальной толщины, мм | ||
От 6 до 10 включ. | От 11 до 17 включ. | От 18 до 25 включ. | |
1 Предел прочности при изгибе по главной оси плиты, МПа, не менее, () | 20 | 18 | 16 |
2 Предел прочности при изгибе по второстепенной оси плиты, МПа, не менее, () | 10 | 9 | 8 |
3 Модуль упругости при изгибе по главной оси плиты, МПа, не менее, () | 2500 | 2500 | 2500 |
4 Модуль упругости при изгибе по второстепенной оси плиты, МПа, не менее, () | 1200 | 1200 | 1200 |
5 Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты, МПа, не менее, () | 0,30 | 0,28 | 0,26 |
6 Разбухание по толщине за 24 ч, не более, () | 25 | 25 | 25 |
5.7 Физико-механические показатели плит типа ОСП-2 должны соответствовать нормам, указанным в таблице 4.
Таблица 4
Наименование показателя | Норма для плит номинальной толщины, мм | ||||
От 6 до 10 включ. | От 11 до 17 включ. | От 18 до 25 включ. | От 26 до 31 включ. | От 32 до 40 включ. | |
1 Предел прочности при изгибе по главной оси плиты, МПа, не менее, () | 22 | 20 | 18 | 16 | 14 |
2 Предел прочности при изгибе по второстепенной оси плиты, МПа, не менее, () | 11 | 10 | 9 | 8 | 7 |
3 Модуль упругости при изгибе по главной оси плиты, МПа, не менее, () | 3500 | 3500 | 3500 | 3500 | 3500 |
4 Модуль упругости при изгибе по второстепенной оси плиты, МПа, не менее, () | 1400 | 1400 | 1400 | 1400 | 1400 |
5 Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты, МПа, не менее, () | 0,34 | 0,32 | 0,30 | 0,29 | 0,26 |
6 Разбухание по толщине за 24 ч, не более, () | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
5.8 Физико-механические показатели плит типа ОСП-3 должны соответствовать нормам, указанным в таблице 5.
Таблица 5
Наименование показателя | Норма для плит номинальной толщины, мм | ||||
От 6 до 10 включ. | От 11 до 17 включ. | От 18 до 25 включ. | От 26 до 31 включ. | От 32 до 40 включ. | |
1 Предел прочности при изгибе по главной оси плиты, МПа, не менее, () | 22 | 20 | 18 | 16 | 14 |
2 Предел прочности при изгибе по второстепенной оси плиты, МПа, не менее, () | 11 | 10 | 9 | 8 | 7 |
3 Модуль упругости при изгибе по главной оси плиты, МПа, не менее, () | 3500 | 3500 | 3500 | 3500 | 3500 |
4 Модуль упругости при изгибе по второстепенной оси плиты, МПа, не менее, () | 1400 | 1400 | 1400 | 1400 | 1400 |
5 Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты, МПа, не менее, () | 0,34 | 0,32 | 0,30 | 0,29 | 0,26 |
6 Разбухание по толщине за 24 ч, не более, () | 15 | 15 | 15 | 15 | 15 |
5.9 Физико-механические показатели плит типа ОСП-4 должны соответствовать нормам, указанным в таблице 6.
Таблица 6
Наименование показателя | Норма для плит номинальной толщины, мм | ||||
От 6 до 10 включ. | От 11 до 17 включ. | От 18 до 25 включ. | От 26 до 31 включ. | От 32 до 40 включ. | |
1 Предел прочности при изгибе по главной оси плиты, МПа, не менее, () | 30 | 28 | 26 | 24 | 22 |
2 Предел прочности при изгибе по второстепенной оси плиты, МПа, не менее, () | 16 | 15 | 14 | 13 | 12 |
3 Модуль упругости при изгибе по главной оси плиты, МПа не менее, () | 4800 | 4800 | 4800 | 4800 | 4800 |
4 Модуль упругости при изгибе по второстепенной оси плиты, МПа, не менее, () | 1900 | 1900 | 1900 | 1900 | 1900 |
5 Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты, МПа, не менее, () | 0,50 | 0,45 | 0,40 | 0,35 | 0,30 |
6 Разбухание по толщине за 24 ч, не более, () | 12 | 12 | 12 | 12 | 12 |
5.10 Нормы физико-механических показателей плит, указанных в 5.1, 5.2, 5.4, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9 кроме разбухания по толщине, указаны для плит после кондиционирования до равновесного влагосодержания в условиях относительной влажности воздуха 65±5% и температуре 20±2 °С.
Нормы показателя разбухания по толщине указаны для плит, без их кондиционирования в тех же условиях атмосферы, с влагосодержанием, равновесным в естественных условиях.
5.11 Для определения влагостойкости плит типов ОСП-3 и ОСП-4 характеризуемой снижением норм предела прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты и предела прочности при изгибе по главной оси применяют согласно таблице 7 метод циклических испытаний по Приложению А и метод испытания кипячением по Приложению Б.
Таблица 7
Метод определения влагостойкости плит | Наименование показателя | Тип плиты | Допускаемое снижение норм для плит номинальной толщины, мм | ||||
От 6 до 10 включ. | От 11 до 17 включ. | От 18 до 25 включ. | От 26 до 31 включ. | От 32 до 40 включ. | |||
Метод циклических испытаний** | Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты после испытания, МПа, не менее, ()* | ОСП-3 | 0,18 | 0,15 | 0,13 | 0,10 | 0,08 |
ОСП-4 | 0,21 | 0,17 | 0,15 | 0,10 | 0,08 | ||
Предел прочности при изгибе по главной оси плиты после испытания, МПа, не менее, () | ОСП-3 | 9,0 | 8,0 | 7,0 | 6,0 | 6,0 | |
ОСП-4 | 15,0 | 14,0 | 13,0 | 6,0 | 6,0 | ||
Метод испытания кипячением | Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты после испытания, МПа, не менее, ()* | ОСП-3 | 0,15 | 0,13 | 0,12 | 0,06 | 0,05 |
ОСП-4 | 0,17 | 0,15 | 0,13 | 0,06 | 0,05 | ||
* При контроле показателя предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты после испытания, изготовитель применяет один из указанных методов. ** Влагостойкость плит методом циклических испытаний определяют одним из указанных показателей |
5.12 Предельно-допустимые нормы содержания формальдегида в плите, выделения формальдегида из плиты в воздух, для плит классов эмиссии формальдегида Е0.5, Е1 и Е2 не должны превышать значений, указанных в таблице 8. Плиты, изготовленные без формальдегидосодержащих материалов, относят к классу Е0.5 без испытаний. Для определения класса эмиссии формальдегида изготовитель применяет один из методов указанных в таблице 8.
Таблица 8
Класс эмиссии формальдегида | Предельно-допустимые нормы содержания формальдегида в плите, установленные перфораторным методом, мг/100 г абс. сухой плиты | Предельно-допустимые нормы выделения формальдегида из плиты в воздух, установленные методом испытания в климатической камере, мг/м воздуха |
Е0.5 | До 4,0 включ. | До 0,08 включ. |
Е1 | Св. 4,0 до 8,0 включ. | Св. 0,08 до 0,124 включ. |
Е2 | Св.8,0 до 30,0 включ. | Св. 0,124 до 1,25 включ. |
Примечание: 1. Содержание формальдегида в плите установлено для плит с абсолютной влажностью 6,5%. Для плит с другой абсолютной влажностью (в диапазоне от 3% до 10%) указанное в таблице содержание формальдегида в плите необходимо умножить на коэффициент , который вычисляют по формуле
|
5.13 Маркировка
5.13.1 Маркировку наносят непосредственно на плиту и (или) ярлык (этикетку) упаковки и (или) в товаросопроводительной документации методом контактной печати или в виде четкого оттиска штампа темным цветом. На плиты можно наносить цветную маркировку, как указано в Приложении В.
При маркировке продукции соблюдают нормы законодательства, действующего в государствах — участниках Соглашения и устанавливающего порядок маркирования продукции информацией на государственном языке.
5.13.2 Маркировка, наносимая непосредственно на плиту, должна содержать:
— наименование и (или) товарный знак (при наличии) предприятия-изготовителя;
— условное обозначение плиты;
— дату изготовления (число, месяц, год) и номер смены.
5.13.3 На ярлыке (этикетке) упаковки и в товаросопроводительной документации наносят маркировку по 5.13.2 и дополнительно указывают:
— наименование страны-изготовителя;
— юридический адрес предприятия-изготовителя;
— количество плит в штуках и (или) в м и (или) м.
При поставке продукции на экспорт допускается наносить дополнительную информацию по согласованию изготовителя с заказчиком, а также маркировать продукцию на языке потребителя.
5.13.4 Плиты, поставляемые потребителям, сопровождаются документом о качестве, содержащим информацию по 5.13.2, и дополнительно основные характеристики продукции по результатам проведенных испытаний при приемке с указанием нормативных документов, по которым они установлены, и (или) подтверждение о соответствии продукции требованиям настоящего стандарта.
5.13.5 Транспортная маркировка по ГОСТ 14192.
5.14 Упаковка
5.14.1 Плиты формируют в транспортные пакеты. В пакеты укладывают плиты одного размера, типа, партии, вида поверхности по степени обработки и класса эмиссии формальдегида.
5.14.2 Транспортные пакеты формируют на поддоне или на прокладках с применением верхней и нижней обложек из любого листового материала, размеры которых должны быть не меньше размеров упаковываемых плит, или без них.
5.14.3 Высоту сформированного транспортного пакета устанавливают с учетом характеристик грузоподъемных механизмов и грузоподъемности транспортных средств.
5.14.4 Вид и средства скрепления плит в пакетированном виде — по ГОСТ 21650, ГОСТ 24597, ГОСТ 26663 и другой технической документации.
По согласованию с потребителем допускается использовать другие виды и средства упаковки или транспортировать плиты без упаковки при условии обеспечения сохранности и качества.
6 Требования безопасности и охрана окружающей среды
6.1 Плиты изготовляют с применением материалов и компонентов, разрешенных для их применения национальными органами санитарно-эпидемиологического надзора.
6.2 Содержание химических веществ в плитах кроме формальдегида (см. 5.12) не должно превышать предельно допустимых норм их выделения в воздух для данной продукции, установленных нормативными документами национальных органов санитарно-эпидемиологического надзора.
6.3 Содержание химических веществ в воздухе производственных помещений не должно превышать предельно допустимой концентрации (ПДК) для рабочей зоны согласно нормативным документам национальных органов по санитарно-эпидемиологическому надзору.
6.4 Производство плит должно отвечать требованиям безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.2.003, ГОСТ 12.3.042, ГОСТ 12.4.021.
6.5 Выбросы в атмосферу вредных веществ при производстве плит не должны превышать норм допустимых выбросов, установленных в соответствии с ГОСТ 17.2.3.02 и нормативными документами национальных органов санитарно-эпидемиологического надзора.
6.6 Отходы, образующиеся при производстве плит, утилизируют, размещают и обезвреживают в соответствии с технической документацией национальных органов санитарно-эпидемиологического надзора.
6.7 Лица, связанные с изготовлением плит, должны быть обеспечены средствами индивидуальной защиты по ГОСТ 12.4.011.
7 Правила приемки
7.1 Плиты предъявляют к приемке партиями. Партией считают количество плит одного типа, размера, обработки поверхности и класса эмиссии формальдегида, изготовленных по одному технологическому режиму за ограниченный период времени (например, в течение одной смены) и оформленных одним документом о качестве.
7.2 Отбор плит по ГОСТ 18321.
7.3 При проверке размеров по 4.1, отклонения от прямолинейности кромок по 5.1, отклонение от перпендикулярности кромок по 5.2, дефектов на поверхности плит по 5.5 от каждой партии отбирают плиты в количестве, указанном в таблице 9.
Таблица 9
В штуках
Количество плит в партии | Контролируемый показатель | ||||||||
4.1, 5.1, 5.2 | 5.5 | ||||||||
Объем выборки | Приемочное число | Объем выборки | Приемочное число | ||||||
До | 500 | 8 | 1 | 13 | 3 | ||||
От | 501 | до | 1200 | включ. | 13 | 2 | 20 | 3 | |
« | 1201 | « | 3200 | « | 13 | 2 | 32 | 5 | |
« | 3201 | « | 10000 | « | 20 | 3 | 32 | 5 |
7.4 Для проверки физико-механических показателей от каждой партии отбирают плиты в количестве, указанном в таблице 10.
Таблица 10
Количество плит в партии, шт. | Объем выборки, шт. | Приемочная постоянная | ||||
До | 280 | 3 | 1,12 | |||
От | 281 | до | 500 | включ. | 4 | 1,17 |
« | 501 | « | 1200 | « | 5 | 1,24 |
« | 1201 | « | 3200 | « | 7 | 1,33 |
« | 3201 | « | 10000 | « | 10 | 1,41 |
7.5 Для контроля содержания формальдегида в плите и выделения формальдегида в воздух отбирают одну плиту вне зависимости от объема партии.
7.6 Партию считают соответствующей требованиям настоящего стандарта и принимают, при следующих условиях:
— количество плит, не отвечающих требованиям стандарта по размерам, отклонениям от прямолинейности кромок, отклонениям от перпендикулярности кромок, дефектам на поверхности плит, меньше или равно приемочному числу, установленному в таблице 9;
— нижнее значение — вычисленное по формуле (1) для показателей: предела прочности при изгибе по главной оси плиты, предела прочности при изгибе по второстепенной оси плиты, модуля упругости при изгибе по главной оси плиты, модуля упругости при изгибе по второстепенной оси плиты, предела прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты, равны или более приемочной постоянной, указанной в таблице 10;
— верхнее значение — вычисленное по формуле (2) для показателя разбухание по толщине, меньше или равно приемочной постоянной, указанной в таблице 10
(1)
(2)
где — среднее арифметическое значение показателя при испытании плит, отобранных в выборку;
и — соответственно нижний и верхний пределы значений показателей;
— среднеквадратичное отклонение, результатов испытаний.
Результаты округляются до второго десятичного знака;
— содержание формальдегида или выделение формальдегида соответствует нормам, установленным в таблице 8.
8 Методы испытаний
8.1 Подготовку образцов к испытаниям для определения физико-механических показателей проводят по ГОСТ 10633.
8.2 Проверку длины, ширины, толщины проводят по ГОСТ 27680. Проверку перпендикулярности кромок проводят по ГОСТ 27680 или по разности длины диагоналей по пласти, измеренной металлической рулеткой с ценой деления 1 мм по ГОСТ 7502. Проверку отклонения от прямолинейности кромок проводят по ГОСТ 27680 при помощи приспособления или поверочной линейки по ГОСТ 8026 длиной 1000 мм не ниже второго класса точности и набора щупов N 4.
8.3 Плотность, предельное отклонение плотности в пласти плиты, абсолютную влажность и разбухание по толщине определяют по ГОСТ 10634.
8.4 Предел прочности и модуль упругости при изгибе плит номинальной толщины до 25 мм включительно определяют по ГОСТ 10635, а свыше 25 мм — по Приложению В.
8.5 Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты определяют по ГОСТ 10636.
8.6 Влагостойкость плит методом циклических испытаний определяют по Приложению А. Влагостойкость плит методом кипячения определяют по Приложению Б.
8.7 Содержание формальдегида в плите определяют по ГОСТ 27678 не реже одного раза в 7 суток, а также при изменении в технологических параметрах производства плит или применяемых связующих. При разногласиях в оценке качества продукции испытания проводят фотоколориметрическим способом по ГОСТ 27678. Выделение формальдегида из плиты в воздух определяют по ГОСТ 30255 с периодичностью один раз в полугодие.
8.8 Дефекты на поверхности плит оценивают визуально. Определение волнистости на поверхности плиты проводят сравнением с образцом, утвержденным в установленном порядке.
8.9 Выкрашивание угла и скол кромки определяют при помощи металлической линейки по ГОСТ 427.
9 Транспортирование и хранение
9.1 Плиты транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с правилами перевозки грузов, действующими на данном виде транспорта с обязательным предохранением их от атмосферных осадков и механических повреждений.
9.2 Условия хранения и складирования плит у потребителя должны обеспечивать сохранность их формы и исключать механические повреждения во время хранения.
9.3 Плиты должны храниться в сухих, чистых, крытых проветриваемых помещениях при температуре не ниже 5 °С и относительной влажности воздуха не выше 65%, в горизонтальном положении в штабелях высотой до 4,5 м, состоящих из стоп или транспортных пакетов, разделенных брусками-прокладками толщиной и шириной не менее 80 мм и длиной не менее ширины плиты, или на поддонах. Допускается разность толщин прокладок, используемых для одной стопы или транспортного пакета, не более 5 мм. Бруски-прокладки укладывают, как правило, под прямым углом к главной оси плит с интервалами не более 600 мм в одних вертикальных плоскостях. Расстояние от крайних брусков-прокладок до торцов плиты не должно превышать 250 мм.
Допускаются другие условия хранения плит при обеспечении их сохранности и безопасности.
10 Гарантия изготовителя
10.1 Изготовитель гарантирует соответствие плит требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий хранения и транспортирования в течение 12 месяцев с момента изготовления.
10.2 Гарантийный срок хранения указывают в маркировке продукции или в договорах (контрактах) на ее поставку.
10.3 По истечении гарантийного срока хранения перед применением, плиты проверяют на соответствие требованиям настоящего стандарта.
Приложение А (обязательное). Определения влагостойкости плит методом циклических испытаний
Приложение А
(обязательное)
А.1 Сущность метода
Образцы плит, прошедшие кондиционирование, подвергают трем циклам обработки, каждый из которых включает выдерживание в воде, замораживание, сушку при повышенной температуре и охлаждение. После циклической обработки испытываемые образцы повторно кондиционируют, после чего определяют их толщину и прочностные показатели.
А.2 Средства измерений и вспомогательное оборудование
Ванна для воды с температурой (20±1) °С, с приспособлением для размещения образцов и возможностью термостатического контроля.
Морозильная камера с устанавливаемой и регулируемой температурой от минус 12 °С до минус 20 °С. Температуру внутри шкафа перед помещением испытуемых образцов устанавливают не более чем за 1 ч и поддерживают постоянной.
Лабораторный сушильный шкаф с принудительной равномерной вентиляцией воздуха с температурой (70±2) °С и воздухообменом (25±5) раз в час. Температуру (70±2) °С внутри шкафа устанавливают не более чем за 2 часа до помещения образцов и поддерживают постоянной.
Микрометр по ГОСТ 6507 с диаметром измерительной губки и пятки не менее 15 мм.
Линейка измерительная металлическая по ГОСТ 427.
Аппаратура и материалы по ГОСТ 10635, ГОСТ 10636.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
А.3 Отбор образцов
Отбор плит от партии для проведения испытаний проводят по 7.4. Для определения предела прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты из каждой плиты, попавшей в выборку, вырезают 8 испытуемых образцов по ГОСТ 10633, испытуемые образцы должны соответствовать требованиям ГОСТ 10636. Для определения предела прочности при изгибе по главной оси из каждой плиты, попавшей в выборку, вырезают 6 испытуемых образцов по ГОСТ 10633, испытуемые образцы должны соответствовать требованиям ГОСТ 10635.
А.4 Кондиционирование образцов
Образцы кондиционируют до постоянной массы (равновесного влагосодержания) при относительной влажности воздуха (65±5)% и температуре (20±2) °С. Массу образца считают постоянной, если результаты двух последовательных взвешиваний, проведенных с интервалом в 24 часа, отличаются друг от друга не более чем на 0,1% от его массы.
А.5 Проведение испытаний
А.5.1 Измерение образцов
Длину, ширину и толщину каждого образца измеряют по ГОСТ 27680.
А.5.2 Испытательный цикл
В течение испытательного цикла испытуемые образцы подвергают трем последовательным обработкам по А.5.2.1, А.5.2.2, А.5.2.3, А.5.2.4.
А.5.2.1 Выдержка образцов в воде
Образцы выдерживают в воде с рН (7±1) при температуре (20±1) °С в течение (72±1) ч. В воде образцы устанавливают на кромку. Расстояние между их сторонами, а также от стенок и дна ванны должно быть не менее 15 мм. Верхнюю кромку образца располагают ниже уровня воды на расстоянии (25±5) мм. После выдерживания в воде испытываемые образцы вынимают из ванны и их поверхности в течение нескольких минут промокают фильтровальной бумагой.
А.5.2.2 Замораживание образцов
Образцы из ванны после промакивания до сухой поверхности помещают в морозильную камеру с температурой от минус 12 °С до минус 20 °С. Образцы в камере устанавливают на кромку, с расстоянием между их сторонами — не менее 15 мм.
Продолжительность периода замораживания (24±1) ч.
А.5.2.3 Сушка образцов
Испытываемые образцы, вынутые из морозильной камеры, помещают в сушильный шкаф и устанавливают на кромку на расстоянии друг от друга не менее 15 мм. Заполнение объема шкафа образцами не должно превышать 10%.
Продолжительность периода сушки при температуре (70±2) °С составляет (70±1) ч.
А.5.2.4 Охлаждение образцов
Вынутые из сушильного шкафа испытываемые образцы устанавливают на кромки в помещении с температурой (20±5) °С на расстоянии друг от друга не менее 15 мм.
Продолжительность периода охлаждения составляет (4±0,5) ч.
А.5.3 Повторение испытательного цикла
После охлаждения испытываемые образцы вторично подвергают обработке, как указано в А.5.2.1, А.5.2.2, А.5.2.3, А.5.2.4. По завершении второго цикла выполняют таким же образом третий испытательный цикл. При последующих циклах испытываемые образцы устанавливают в оборудовании повернутыми на 90 град, относительно того положения, которое занимал образец в предыдущем цикле.
Для полного проведения трех испытательных циклов требуется 21 день.
Испытываемые образцы, прошедшие три испытательных цикла, подвергают кондиционированию до постоянной массы и определяют показатели по А.5.4 и А.5.5.
А.5.4 Определение предела прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты
Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты определяют по ГОСТ 10636. Если поверхность образцов шероховатая и неровная, то перед приклеиванием к колодкам ее необходимо выровнять с помощью шлифовальной шкурки до шероховатости поверхности Rm, не более 63 мкм.
А.5.5 Определение предела прочности при изгибе
Предел прочности при изгибе плит номинальной толщины 25 мм включительно определяют по ГОСТ 10635, а свыше 25 мм по Приложению В. При расчете предела прочности при изгибе по главной оси плиты толщину образца определяют после циклического испытания.
А.5.6 Обработка результатов испытания
За результат испытания принимают среднеарифметическое значение разницы показателя до обработки и после обработки.
Результат округляют до двух значащих цифр после запятой и выражают в МПа.
Приложение Б (обязательное). Определение влагостойкости плит методом кипячения
Приложение Б
(обязательное)
Б.1 Сущность метода
Образцы плит, прошедшие кондиционирование, подвергают кипячению в водяной бане, после чего их охлаждают до комнатной температуры и определяют прочностные показатели.
Б.2 Средства измерений и вспомогательное оборудование
Ванна для воды с приспособлением для размещения образцов и возможностью термостатического контроля.
Водяная баня с подогревом воды до точки кипения (100 °С).
Лабораторный сушильный шкаф с принудительной равномерной вентиляцией воздуха с температурой и воздухообменом (25±5) раз в час. Температуру (70±2) °С внутри шкафа перед помещением опытных образцов устанавливают не менее чем за 2 часа и поддерживают постоянной.
Микрометр по ГОСТ 6507 с диаметром измерительной губки и пятки не менее 15 мм.
Аппаратура и материалы по ГОСТ 10636.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Б.3 Отбор образцов
Отбор плит от партии для проведения испытаний проводят по 7.4. Для определения предела прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты из каждой плиты, попавшей в выборку, вырезают 8 испытуемых образцов по ГОСТ 10633, испытуемые образцы должны соответствовать требованиям ГОСТ 10636.
Б.4 Кондиционирование образцов
Образцы кондиционируют до постоянной массы (равновесного влагосодержания) при относительной влажности воздуха (65±5)% и температуре (20±2) °С. Массу образца считают постоянной, если результаты двух последовательных взвешиваний, проведенных с интервалом в 24 часа, отличаются друг от друга не более, чем на 0,1% от массы образца.
Б.5 Проведение испытаний
Б.5.1 Измерение образцов
Длину и ширину каждого образца измеряют по ГОСТ 27680.
Б.5.2 Кипячение образцов
Образцы помещают в ванну с водой, образцы в ванне должны быть полностью покрыты водой, имеющей температуру (20±2) °С и рН (7±0,5). Расстояние между образцами, а также от стенок и дна водяной бани до образцов должно быть не менее 15 мм для того, чтобы вода могла свободно циркулировать. Верхняя кромка образцов должна находиться ниже уровня воды на расстоянии (25±5) мм. Воду обновляют в начале каждого испытания.
Воду в бане нагревают до точки кипения (100 °С) в течение (90±10) мин. Продолжительность кипячения образцов (120±5) мин.
Б.5.3 Охлаждение образцов.
После кипячения образцы вынимают из водяной бани и помещают в ванну для воды с температурой воды (20±5) °С на время (60±5) мин. Образцы размещают лицевой стороной в вертикальном положении на расстоянии друг от друга и от стенок ванны не менее 15 мм.
Затем образцы вынимают из ванны, удаляют влагу с поверхности образцов фильтровальной бумагой и помещают лицевой стороной в горизонтальном положении в сушильный шкаф при температуре (70±2) °С на (960±15) мин.
Далее образцы вынимают из сушильного шкафа, охлаждают на воздухе до комнатной температуры, после чего определяют предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты по Б.5.4.
Б.5.4 Определение предела прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты
Предел прочности при растяжении перпендикулярно к пласти плиты определяют по ГОСТ 10636. Если поверхность образцов шероховатая и неровная, то перед приклеиванием к колодкам ее необходимо выровнять с помощью шлифовальной шкурки до шероховатости поверхности Rm, не более 63 мкм.
Б.5.5 Обработка результатов испытания
За результат испытания принимают среднеарифметическое значение разницы показателя до обработки и после обработки.
Результат округляют до двух значащих цифр после запятой и выражают в МПа.
Приложение В (обязательное). Определение предела прочности и модуля упругости при изгибе плит номинальной толщины свыше 25 мм
Приложение В
(обязательное)
В.1 Сущность метода
Образцы плит, прошедшие кондиционирование, подвергают испытаниям на определение максимальной нагрузки, разрушающей образец при статическом изгибе с вычислением напряжения при этой нагрузке, и определение модуля упругости образца при статическом изгибе.
В.2 Средства измерений и вспомогательное оборудование
Испытательная машина по ГОСТ 10635.
Испытательное устройство для создания симметричной, относительно длины образца, зоны чистого изгиба, состоящее из горизонтальных и параллельных друг другу основания и траверсы. На основании установлены две опоры параллельно друг другу с возможностью перемещения по нему в горизонтальном направлении. Между опорами параллельно им расположены два нагружающих ножа, жестко закрепленных на траверсе, перемещающиеся в вертикальной плоскости относительно опор при движении нагружающего элемента испытательной машины. Опоры и нагружающие ножи имеют цилиндрические поверхности радиусом (15±0,5) мм. Высота опор и нагружающих ножей должна быть не менее ширины испытываемых образцов. На основании опор должны быть нанесены отметки для установки образцов по центру опор. Расстояние между центрами нагружающих ножей должно быть (300±5) мм. Расстояние от центра опоры до центра близлежащего к нему ножа должно быть (400±1) мм.
Прибор для измерения прогиба образца в зоне чистого изгиба с измерительным устройством линейных перемещений с погрешностью измерения перемещения не более 0,01 мм и приспособлением для крепления измерительного устройства по нейтральной оси образца.
Инструмент для измерения линейных размеров образцов и расстояния между опорами по ГОСТ 10633.
В.3 Отбор образцов и подготовка их к испытанию
Правила отбора, количество, точность изготовления, кондиционирование образцов и подготовка их к испытанию по ГОСТ 10633 и ГОСТ 10635 с учетом требуемой длины образцов для установки в испытательное устройство согласно В.2.
В.4 Проведение испытаний
В.4.1 Установку опор испытательного устройства и размещение испытываемого образца на них выполняют в соответствии с рисунком В.1.
Рисунок В.1
В.4.2 В пределах группы образцов с одинаковой ориентацией стружек одну половину испытывают, укладывая на опоры испытательного устройства лицевой пластью вверх, а другую половину — лицевой пластью вниз.
В.4.3 При определении предела прочности при изгибе производят нагружение образца с постоянной скоростью до разрушения и регистрируют максимальную нагрузку с точностью до 1%.
Время от начала нагружения до разрушения образца должно составлять (300±120) с, в среднем около 300 с на каждый образец.
В.4.4 При определении модуля упругости при изгибе производят нагружение образца со скоростью перемещения нагружающих ножей от 1 до 2 мм/мин в диапазоне от 0,1 до 0,4 разрушающей нагрузки и снимают не менее 8 показаний прогиба образца через равные интервалы увеличения нагрузки.
Прогиб образца измеряют с точностью 0,01 мм с обеих его сторон в области постоянного изгибающего момента посередине между двумя точками, расположенными на продольной оси образца на расстоянии 250 мм друг от друга. При этом на чувствительный элемент измерительного прибора не должно влиять местное смятие образца.
По полученным значениям приращений нагрузки и прогиба строят прямолинейный график, усредняя разброс отдельных значений.
Допускается определять угловой коэффициент прямой аналитически (без построения графика) — сглаживанием разброса точек прямой по методу наименьших квадратов.
В.5 Обработка результатов
В.5.1 Предел прочности при изгибе образца () вычисляют в МПа по формуле
, (В.1)
где — сила нагружения, действующая на образец в момент разрушения, Н;
— расстояние от центра опоры испытательного устройств до центра близлежащего к ней нагружающего ножа, мм;
— ширина образца, мм;
— толщина образца, мм.
Результат округляют с точностью до первого десятичного знака.
В.5.2 Модуль упругости при изгибе образца () вычисляют в МПа по формуле
, (В.2)
где — расстояние между точками приложения к испытываемому образцу по нейтральной его оси приспособления для крепления измерительного устройства, которое должно быть равно 250 мм;
— расстояние от центра опоры испытательного устройства до центра близлежащего к ней нагружающего ножа;
— ширина образца, мм;
— толщина образца, мм;
— фиксированное (2-3 интервала) приращение нагрузки Н;
— приращение прогиба, соответствующее фиксированному приращению нагрузки, определяемому по графику с точностью до 0,1 мм.
При аналитическом определении углового коэффициента прямой в Н/мм модуль упругости образца вычисляют по формуле
. (В.3)
Результат округляют с точностью до целого числа.
В.5.3 За результат испытания плиты принимают среднее арифметическое значение результатов испытания всех образцов, отобранных из данной плиты с округлением, указанным в В.5.1 и В.5.2.
В.5.4 Результаты испытаний заносят в протокол, составленный по ГОСТ 10633.
Приложение Г (рекомендуемое). Цветовое обозначение плит
Приложение Г
(рекомендуемое)
Для обозначения типов плит используют определенный набор цветов. Первый цвет определяет плиты, несущие нагрузку (используют одну или две полоски этого цвета), второй цвет обозначает плиту, предназначенную для использования в сухих или влажных условиях.
Первый цвет:
— белый — плиты, не несущие нагрузку;
— желтый — плиты, несущие нагрузку.
Второй цвет:
— голубой — плиты, для применения в сухих условиях;
— зеленый — плиты, для применения во влажных условиях.
Таблица Г.1 — Цветовое обозначение плит
Тип плит | Цветовой код |
ОСП-1 | Белый, голубой |
ОСП-2 | Желтый, желтый, голубой |
ОСП-3 | Желтый, желтый, зеленый |
ОСП-4 | Желтый, зеленый |
Приложение Д (обязательное). Применение плит различных классов эмиссии формальдегида
Приложение Д
(обязательное)
Таблица Д.1
Класс эмиссии формальдегида плит | Применение плит |
Е0.5; Е1 | В качестве конструкционных элементов в жилых и общественных зданиях, для производства мебели и мебели для общественных помещений, а также изделий и конструкций, эксплуатируемых внутри жилых помещений |
Е2 | Для производства изделий, эксплуатируемых вне жилых помещений |
____________________________________________________________________________________
УДК 684.4:006.354 ОКС 79.060.20
Ключевые слова: плиты древесные с ориентированной стружкой, термины, определения, размеры, классификация, технические требования, требования безопасности, правила приемки, методы испытаний, транспортирование, хранение, гарантии изготовителя
Электронный текст документа
подготовлен ЗАО «Кодекс» и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2014
Насколько ОСБ токсичный материал — DAKO-GROUP
Как известно, спрос рождает предложение. А чем популярнее и востребованнее становятся осб плиты, тем больше толков появляется вокруг этого стройматериала. Одним из самых твердых убеждений является то, что в состав осб плит входит формальдегид, что делает осб плиты токсичными.
В этой статье мы подробно опишем материалы, которые используются для производства этого стройматериала, что поможет вам самим убедиться в уровне вреда от плит осб. Для начала разберемся, что же такое, эти осб плиты.
Основные материалы для производства ОСБ плитОриентированно-стружечные плиты (ОСП, OSB или ОСБ) это стройматериал, состоящий из древесной стружки, уложенной слоями в определенном направлении. Такое строение плит позволяет обладать высокой прочностью, а дополнительные компоненты, входящие в состав материала, придают плитам осб влагостойкость и устойчивость к температурным перепадам.
Самым главным компонентом для изготовления плит является водоотталкивающий клей. В плитах высокого качества он составляет всего до 10% от общего состава. В составе такого клея, как правило, находятся синтетические смолы. Они могут быть фенолформальдегидные, меламиноформальдегидные или карбамидоформальдегидные.
Токсичность осб плит зависит от процентного содержания этих веществ в клее. Львиная доля формальдегида испаряется уже в процессе производства плит. Происходит это в момент прессования плит под воздействием температуры в 200°С. Еще часть этого вещества испаряется в течение полугода с момента производства.
Следует учитывать тот факт, что в итоге, формальдегид в осб содержится в том же количестве, в каком присутствует в натуральной древесине. Фабрики по производству плит осб высокого качества используют полимерные МДИ смолы. Такие смолы изготавливают на основе метилендифенилдиизоцианата.
Этот изомер является наименее токсичным соединением. Его широко используют в монтажных пенах, для производства СИП-панелей, в изоляции и холодильных установках. Все это окружает нас ежедневно, и никак не влияет на здоровье. Производители, используя клей на основе полимерных МДИ смол маркируют плиты ОСБ пометкой ЭКО.
EN 300 – международный стандарт качественных плитПроизводство любой продукции обязательно органами, контролирующими качество и соответствие определенным нормам. Сегодня у каждого товара, который отвечает этим нормам, присутствует маркировка ДСТУ и ГОСТ (Государственный стандарт). Так как применение осб плит распространяется по всему миру, и производство осуществляется во многих странах, знаком качества является соответствие стандарту по производству осб плит EN 300.
Рассмотрим этот стандарт на примере плиты осб 3. Нормы для осб 3:
EN 300 — type OSB 3; EN 13501-1: class D-s1, d0; EN 13986:2004+A1:2015
КЛАСС ЭМИССИИ: E1 (EN ISO 12460-5)
Нас интересует класс эмиссии, который показывает допустимое содержание свободного формальдегида в 100 г сухой плите осб. Он обозначается буквой E и цифрой от 0 до 2. Чем ниже эта цифра – тем безопаснее материал для здоровья человека.
В случае с осб 3, согласно стандарту производства, плиты соответствуют классу эмиссии Е1. И согласно ДСТУ EN 300-2008, значение перфорации равно до 8 мг/100 г сухой плиты. То есть в 100 г сухой осб плиты допустимо содержание не более 8 г формальдегида. Для примера, в лаке для ногтей содержится не менее 5% формальдегида, в шампуне не менее 0,1%, в креме для лица до 5%
А значение стойкого состояния эмиссии указывает на выделение в воздух не более 0,124 мг/м³ свободного формальдегида. К примеру, детская мебель соответствует классу эмиссии Е1. Все эти данные указывают на то, вред осб плит достаточно преувеличен. А формальдегид окружает нас каждый день в гораздо большем количестве, чем многие думают.
Чтобы убедиться в экологичности плит осб, на предприятиях по их изготовлению используют мерительные приборы. С помощью таких приборов провели детальное исследование СИП-панелей, и пришли к выводам, что содержание формальдегида 0,1 миллионной доли.
Что касается норме EN 13501-1: class D-s1, то она указывает на уровень пожаробезопасности строительного и отделочного материала. Согласно этой норме, осб 3 относится к древесным материалам, и обозначается буквой D, а s1 указывает на то, что элемент конструкции может выделять очень ограниченное количество горючих газов.
Причины слухов о токсичности ОСБ плитМы ни в коем случае не исключаем, что производится опасный осб. Такую продукцию выпускают предприятия, которые не соблюдают стандарты качества. Связующим веществом в плитах таких производителей является дешевый клей на основе опасных полимерных соединений.
Как правило, такие плиты не маркируются и имеют ярко выраженный неприятный запах. Продавцы некачественных плит осб не могут предоставить сертификаты, так как ни о каких лабораторных исследованиях плит кустарного производства речь не идет. А в погоне за экономией, люди получают действительно токсичные стройматериалы.
Компании же с мировым именем ежегодно вкладывают значительные финансы в экологичность и стандартизацию фабрик. Это позволяет им быть лидерами рынка и эталоном качества. Об этом громче любых слов говорит статистика. На сегодняшний день наиболее широкое применение осб плит по-прежнему остается в Северной Америке – 30% рынка древесных материалов.
В Европе за последние 2 года уровень потребления осб плит вырос на
Существует множество инстанций, которые могут провести внезапную проверку на месте строительства. Любое отклонение от нормы влечет за собой серьезные штрафы и потерю лицензии. Ни один уважающий себя застройщик не станет рисковать своей лицензией ради экономии на стройматериалах.
С ростом популярности плит осб, этот стройматериал встретит еще немало противоречивых мифов. Через этот этап проходит все новое и малоизученное. И прежде, чем покупать осб плиты, о которых вы что-то слышали или что-то знает, лучше проконсультируйтесь у профессионалов.
На основании этой информации и документации, которую вам может предоставить только официальный дилер, вы можете убедиться в том, что применение осб плит от проверенного производителя никоим образом не навредит вам и вашим близким. Компания DAKO-GROUP готова помочь вам в выборе и доставке необходимого количества осб плит высокого качества.
Легкой вам стройки!
Проволока стальная низкоуглеродистая термически обработанная ф1,2 т/о
Проволока стальная низкоуглеродистая термически обработанная ф1,2 т/оДля увеличения картинки нажмите на изображение
Артикул:
Цена за: кг 96.80 ₽ 0 ₽ экономия 0 ₽
Цена за: бухта (80 кг) 7 744 ₽ 0 ₽ экономия 0 ₽
бухта кгбухта (80 кг)т (1000 кг)
Количество кг | 80 |
Количество бухта | 1 |
Объем | ~ м3 |
Вес | ~ кг |
7 744 ₽ 0 ₽ экономия 0 ₽
В наличиимного
Диаметр, мм: 1,231,2Проволока стальная низкоуглеродистая термически обработанная d1,2мм
Термически обработанная проволока производится согласно ГОСТу 3282-74 и отличается круглым сечением. При изготовлении данного вида материала применяется два метода термической обработки:
-обычный отжиг, при котором огонь воздействует непосредственно на саму заготовку;
— отжиг в колпаковой печи.
Благодаря использованию различных типов отжига, неоднородность структуры проволоки значительно снижается, что обеспечивает изготовление надежной и чрезвычайно прочной готовой продукции. Такая проволочная продукция успешно применяется в различных видах промышленного производства, в быту, на строительных площадках, в строительстве машин, при изготовлении ограждений и товаров народного хозяйства.
Термически обработанная проволока изготавливается в соответствии с государственными стандартами, что обеспечивает высокое качество готовой продукции, ее долговечность и универсальность.
Общие характеристики ?
Размеры и вес ?
Диаметр, мм ? :1,2Вес пог.м, кг :0
Модификации
Проволока стальная низкоуглеродистая термически обработанная d1,2мм
Список просмотренных товаров пуст
Список сравниваемых товаров пуст
Список избранного пуст
Ваша корзина пуста
AlfaSystems GoPro GP261D21
F1 2012 — битвы титанов | Мир ПК
Что главное в любой «гонялке» с претензией на реализм? Правильно, адекватное поведение автомобиля! У игры F1 2012 с этим все в полном порядке — ярко выраженная недостаточная поворачиваемость F1 2010 и легкая избыточность F1 2011 теперь в прошлом.
Джентльмены, заводите ваши моторы! |
«Имитатор автогонок класса «Формула-1» с официальной лицензией от FIA: все 12 команд, 24 гонщика и 20 трасс Чемпионата мира 2012 г., аутентичная физика…» и т.д., и т.п. Но разве в сухие строчки пресс-релиза можно вместить всю красоту и страсть настоящего «автосима»? Попробуйте-ка объяснить упертым любителям Need for Speed, в чем прелесть «унылой 2-часовой езды по замкнутому кругу», — замучаетесь! Впрочем, с выходом F1 2012 и у них появился шанс узнать, что обычный обгон в дождь по внешнему радиусу Maggots-Becketts поднимает адреналин поболее всяких безблагодатных «дрифтов» и «нитр» с «винилами»…
Картина маслом: «Сильверстоун, дождь, Хэмильтон vs. Баттон». Настоящим любителям Ф-1 больше ничего и не нужно… |
По сравнению с предыдущей частью новая «Формула» пополнилась аж тремя новыми режимами: Young Driver Test — по сути, обычный наставнический для новичков, к сожалению, неотключаемый; Season Challenge —«кастрированный» чемпионат из 10 укороченных гонок, для любителей «побыстрее и попроще»; Champions Mode, в котором предлагается бросить вызов на трассе каждому из шести чемпионов мира, включая великого Михаэля Шумахера. И ведь, вроде бы, немудреная забава — к примеру, за пять финальных кругов обогнать Себастьяна Феттеля и обязательно успеть поставить лучший круг гонки. Но почему-то она захватывает, особенно если поставить уровень сложности повыше.
Благодаря Codemasters игроки получили возможность опробовать новую трассу в США задолго до настоящих пилотов |
Что главное в любой «гонялке» с претензией на реализм? Правильно, адекватное поведение автомобиля! Специально подчеркну: не на 100% реалистичное, а именно адекватное. Слава богу, у F1 2012 с этим все в полном порядке — остались в прошлом ярко выраженная недостаточная поворачиваемость F1 2010 и легкая избыточность F1 2011. Отдельный респект Codemasters за великолепную реализацию «шинного покера», которым так прославился этот сезон: чуть ошибся с выбором комплекта резины или даже просто не вовремя заехал на смену покрышек — все, пиши пропало, потерял несколько позиций! Ну а что же вы хотели, автосимулятор все-таки, пусть и слегка аркадный.
Кими Райкконен: какой же финн не любит быстрой езды?!] |
«Главные блюда» от разработчиков — «Career Mode», «кооперативный» чемпионат на двоих с приятелем и полноценный онлайн — практически не изменились, разве что у мультиплеера заметно улучшили интерфейс и глубже интегрировали сетевой функционал со Steam. В принципе оно и правильно: зачем ремонтировать то, что не сломалось?! Ну разве что добавить ботам немножко «человечности», а то уж больно безошибочно, как мне показалось, ездят компьютерные пилоты. Пожалуй, больше и пожелать нечего, если, конечно, не впадать в автогоночный экстремизм и брюзжание пуриста.
*************************************************
Ознакомившись с F1 2012, уверенно заявляю: да, с третьей попытки «кодемастеры» довели-таки свою «формульную» серию до ума! Собственно, к игре в ее нынешнем воплощении можно предъявить только одну претензию — это не чистый имитатор, не «хардкор». Что же, возмущенным критикам никто и не обещал еще один rFactor, у F1 2012 другая целевая аудитория. Видели бы вы на форумах многочисленные крики души в стиле «Не могу уехать дальше первого поворота!», куда уж тут плакать по поводу того, что мало настроек и нет телеметрии… На другом полюсе — уже упомянутые любители бездумно «давить тапку» и проходить повороты с отскоком от стены а-ля NFS: их местные реалии сразу вгонят в лютую, бешеную тоску. Тут только один совет на ум приходит — расти над собой, так сказать, стремиться к новым горизонтам. А то так и будете все время одну кнопку зажимать, думая, что это и есть настоящие гонки.
Наименование | Сайт издания или издательства | Наличие в библиотеке |
Лиза | www.burda.ru | Ф5; ЦДИ; ЦГБ |
Литература в школе
с приложением «Уроки литературы». | — | ЦГБ; ЦГДБ |
Мамино солнышко | maminosolnishko.by | ЦДИ |
Маруся | www.marusia.ru | Ф23; ЦГДБ |
Мастерилка | www.karapuz.com | ЦГДБ; ЦДИ |
Маша и медведь | www.egmont.ru | Ф7 |
Мир ПК | www.osp.ru | ЦДИ |
Мир принцесс (Принцесса) | www.egmont.ru | Ф9; Ф7; ЦГДБ |
Мир техники для детей | — | ЦДИ; ЦГДБ |
Миша | misha.voskres.info | Ф1; Ф24 |
Мне 15 | romeo.starnet.ru | Ф2; Ф4; Ф9; Ф1; ЦДИ; Ф20 |
Мой ребенок | www.moy-rebenok.ru | ЦДИ |
Мой уютный дом | www.burda.ru | Ф2; ЦГБ |
Мото | http://www.zr.ru | Ф22 |
Муравейник | — | ЦГДБ |
Мурзилка | www.murzilka.org | Ф4; Ф6; Ф7; Ф9; Ф20; Ф22 |
Мы | — | ЦГДБ |
Начальная школа | n-shkola.ru | Ф1 |
Наш Филиппок | www.filipoc.ru | ЦГДБ |
Огонек | www.kommersant.ru | ЦДИ |
Основы безопасности жизнедеятельности | www.school-obz.org | ЦГДБ |
Отчего и почему? | — | Ф1; Ф7; ЦГДБ |
Охотник | — | Ф24; Ф25 |
Первоклассные родители. 1-4 классы. | 1roditeli.ru | ЦДИ |
Планета женщины | www.bauermedia.ru | ЦГДБ |
Познайка от 6 | www.poznaika.net | ЦДИ |
Праздник в школе | — | ЦДИ |
Проблемы прогнозирования | www.ecfor.ru | ЦДИ |
Простоквашино | www.egmont.ru | Ф1; Ф7 |
Психология и я | www.toloka.com | Ф2;ЦДИ |
Путеводная звезда. Школьное чтение. | www.detfond.org | ЦГДБ |
Радио | www.radio.ru | ЦГБ |
Радуга идей | http://raduga-idey.ru | ЦГДБ |
Родина | www.istrodina.com | ЦГБ; ЦГДБ |
Ромео и Джульетта | — | Ф1; Ф7; ЦГДБ |
Российская экономика: прогнозы и тенденции | http://id.hse.ru/journals | ЦДИ |
Рыболов | www.rybolov.ru | Ф2; Ф9; Ф22; Ф23; Ф26 |
Сабрина | — | ЦГБ |
Сам | www.master-sam.ru | ЦГБ |
Само-делка | www.samo-delka.ru | ЦГДБ |
Сандра | — | Ф5 |
Свирелька. Детям о природе. | www.lazur.ru | Ф3 |
Свободная мысль | postindustrial.net | ЦГБ |
Сельская новь | www.novsel.ru | Ф2 |
Смена | smena-online.ru | Ф2 |
Смешарики | biz.smeshariki.ru | Ф7 |
Справочник руководителя учреждения культуры | www.cultmanager.ru | ЦГБ |
Счастливая и красивая | www.toloka.com | ЦДИ |
Том и Джери | www.egmont.ru | Ф5; Ф9; Ф1; Ф7; ЦГДБ |
Тошка и компания | www.egmont.ru | Ф9; Ф1; Ф7; ЦГДБ |
Урал | uraljournal.ru | ЦГБ |
Уральский следопыт | uralstalker.com | ЦГБ; ЦГДБ |
Успехи и поражения | www.ppressa.ru | Ф2 |
Феи | www.egmont.ru | Ф1; Ф7; ЦГДБ |
Физкультура и спорт | www.fismag.ru | Ф27 |
Финансы | www.finance-journal.ru | ЦДИ |
Худеем правильно | www.hudeem-pravilno.ru | ЦГБ |
Читаем, учимся, играем | www.liber.ru | ЦДИ |
Школа монстров | www.egmont.ru | ЦДИ |
Эксперт | expert.ru | ЦДИ |
Эскиз | www.merrypictures.ru | ЦГДБ |
Юный техник | http://utechnik.ru | ЦГДБ |
Постпроцессор OKUMA OSP-P200M — Mastercam
Посмотрел в шпаргалку. Вот , что пишут:G92 куда то делась что ли? (изменение СК)
Сдвиг и вращение СК (G11, G10) — также из этой бочки.
Что больше подойдет, не знаю.
G92-установка системы координат заготовки
G11-паралельное и поворотное смещение системы координат
G10-отмена G11
Вроде , как из той области , что меня интересует. Только , как это работает на практике?
…Почитал про G10 и G11. Не подходит , т,к. значение смещения надо задать в программе , а я хочу в станке. Про G92 вот , что пишут:
«Функция смены системы координат заготовки меняет систему координат заготовки.
[Формат программирования]
G92 IP_
[Детали]
— G92 автоматически меняет значение смещения нуля заготовки текущей
выбранной системы координат таким образом, что значение координат текущего
положения инструмента будет значением координат, указанным как IP_.
— G92 меняет только систему координат заготовки, которая выбрана в то время,
когда она выполнена; это не влияет на другие системы координат заготовки.
— Значение координаты IP_, указанное в этом кадре, всегда считается как
абсолютное значение независимо от спецификации G90 (абсолютный режим) и
G90 (инкрементный режим).
— Для оси, не указанной с помощью значения координат Р, значение коррекции нуля
заготовки остается неизменным.
— G92 может не указываться в следующих режимах:
— Режим коррекции на радиус режущей кромки инструмента
— Режим трехмерной коррекции
— Режим увеличения/уменьшения геометрии
— Режим параллельного смещения/вращения системы координат
— Выбранный режим системы координат станка»
Как-то не очень понятно.
Краска ФАВОРИТ ВДАК-11 Ф1 акриловая фасадная белая
Фасадная атмосферостойкая акриловая краска
Применяется для наружной окраски зданий и сооружений со сроком службы не менее 3 лет. Используется для работ внутри помещений. Материал экологически полноценный, пожаровзрывобезопасный, практически не имеет запаха, легко перемешивается после длительного хранения и при колеровке. После высыхания материал образует белое ровное матовое, паропроницаемое влагостойкое покрытие, при необходимости его можно мыть водой.
Объект применения
Спальни, Гостиные, Детские комнаты, Общественные помещения, Производственные помещения, Детские учреждения, Лечебно-профилактических учреждениях, Для окон, Для скамеек, Для стульев, Для столов.
Область применения
Внутренняя отделка помещений, Гипсокартонные конструкции, Для стен, Для фасада, Помещения с повышенной влажностью, Помещения с нормальной влажностью.
Тех. характеристики | |
Хранение и транспортировка | Хранить и транспортировать краску в плотно закрытой таре при температуре выше 0С. Допускается транспортирование при температуре до минус 20С в течение не более одного месяца. В случае замораживания краску следует разморозить при комнатной температуре и перемешать до получения однородной массы. Срок хранения до вскрытия упаковки 12 месяцев. |
Инструкция по применению | |
Подготовка поверхности | Поверхность очистить от грязи, пыли, солевых отложений, отслаивающейся старой краски и штукатурки, тщательно обезжирить. Поверхности, ранее покрытые мелом и известковыми красками должны быть тщательно очищены до полного удаления старого покрытия. Интенсивно впитывающие и высокопористые поверхности (штукатурка, гипс и т.п.) рекомендуется предварительно обработать упрочняющим грунтом. |
Тип поверхности | Бетон, Бумага (обои), Дерево, Гипсокартон, ДСП, Камень, Кирпич, Металл, Пластик, Стекло, Стеклохолст (обои), Цементно-песчаные поверхности, Штукатурка, Ячеистый бетон, Шпаклевка |
Инструмент | Валик, Кисть, Распылитель |
Способ нанесения | Краску тщательно перемешать. Наносить кистью, валиком, краскораспылителем. Перед началом покраски сделать пробную выкраску на небольшом участке поверхности. Краску наносить несколькими слоями с промежуточной сушкой, до получения однородной поверхности. |
Температура и условия нанесения | Наносить при температуре не ниже 8С |
Время высыхания | Время высыхания каждого слоя краски один час при температуре 20С и относительной влажности 60-70%. При температуре ниже 15?С, время высыхания каждого слоя до 24 часов. Покрытие полностью набирает заданные свойства в течение двух суток. |
• Число стран, в которых была ликвидирована оспа 1872-1977 гг.
Работа Эдварда Дженнера по оспе, опубликованная в 1797 году, была первым случаем, когда какие-либо научные открытия о вакцинации были представлены широкому медицинскому сообществу. В течение нескольких коротких лет после публикации этой публикации вакцинация была проведена в большинстве европейских стран, и ее влияние начало проявляться почти сразу; особенно в таких странах, как Швеция и Англия. По мере распространения практики вакцинации тяжесть и частота пандемий оспы снизились, и в некоторых регионах болезнь перестала быть эндемической.Исландия впереди
Эпидемии играли значительную роль в истории и развитии Исландии на протяжении всего периода до вакцинации. Географическое положение страны означало, что вирусы не распространялись из других стран так часто, как на материковой части Европы, однако это также означало, что поколения дожили до зрелого возраста, не выработав иммунитета к этим заболеваниям. Когда эти факторы сочетались с высокой концентрацией населения Исландии, это позволяло эпидемиям быстро распространяться среди населения с разрушительными последствиями.Самая известная из этих эпидемий произошла между 1707 и 1709 годами, когда корабль из континентальной Европы доставил оспу в Исландию, и в результате вспышка унесла жизни более трети всего населения.По этим причинам Исландия (в то время являвшаяся доминионом Дании) стала первой страной в мире, которая ввела обязательную вакцинацию в 1802 году. Великая пандемия оспы 1870-х годов была последней вспышкой болезни, которая достигла уровня пандемии в Европе. . В то время никто не знал, что это будет последний зарегистрированный случай естественной оспы в Исландии в 1872 году.Это сделало Исландию первой страной в мире, которая искоренила болезнь на национальном уровне; те же факторы, которые позволили оспе быть настолько разрушительной для населения Исландии в прошлом (т. е. удаленность от континентальной Европы и высокая концентрация населения), стали причиной того, что вакцинация была столь эффективной в девятнадцатом веке.
Прогресс ликвидации
После успеха Исландии пройдет еще 23 года, прежде чем окончательные случаи оспы будут зарегистрированы в любых других европейских странах, при этом Швеция и Норвегия будут единственными странами, которые ликвидировали болезнь в девятнадцатом веке.В 1904 году Французская Гвиана была первой неевропейской территорией, ликвидировавшей вирус, а Океания * стала первым континентом, который это сделал; причем последние зарегистрированные случаи в Новой Зеландии и Австралии имели место в 1914 и 1917 годах соответственно. В Соединенных Штатах Америки был зарегистрирован последний естественный случай оспы в 1948 году, а последний случай заболевания в Европе был зарегистрирован в Португалии в 1953 году. Из-за множества препятствий оказалось, что искоренить оспу труднее на менее развитых континентах; такие как густонаселенность и ограниченная инфраструктура (отсутствие дорог особенно затрудняло борьбу с болезнью в странах Африки к югу от Сахары).Всемирная организация здравоохранения запустила Программу ликвидации оспы в 1966 году, и после ряда агрессивных кампаний вакцинации и сдерживания последний случай естественной оспы был зарегистрирован в Сомали в 1977 году. В течение следующих двух лет ученые продолжали следить за глобальной ситуацией. , но не смог найти новых случаев или вспышек болезни. 8 мая 1980 г. Всемирная ассамблея здравоохранения объявила, что оспа была искоренена, что сделало ее первым (и единственным по состоянию на 2020 г.) заболеванием человека, которое было искоренено.Это было одно из самых значительных и важных медицинских достижений в истории человечества, и оно проложило путь к искоренению других инфекционных заболеваний, таких как полиомиелит и корь; которые, как ожидается, будут уничтожены в ближайшие десятилетия.Оспа — Статистика и факты
В Европе, где имеется гораздо больше (хотя и ограниченных) данных о последствиях оспы, данные показывают, что младенцы и дети подвергались наибольшему риску. В эпоху, предшествовавшую вакцинации, более девяноста процентов смертей от оспы приходилось на людей в возрасте до десяти лет.Случаи заболевания у взрослых были более редкими, поскольку большинство из них уже заразились этой болезнью в детстве. Как правило, это давало пожизненный иммунитет, хотя многие из них остались с тяжелыми рубцами или слепотой на всю оставшуюся жизнь. По оценкам, оспа является причиной одной трети всех случаев слепоты среди взрослых.
Оспа поражает только людей и передается через контакт с каплями воды при кашле или чихании или с инфицированными поверхностями. Обычно инкубационный период составлял от 12 до 14 дней, прежде чем болезнь проявлялась через симптомы, похожие на грипп.Через четыре дня на теле пациента покроется сыпь, в результате чего появятся высыпания, гнойнички и струпья. Самым распространенным и смертоносным штаммом этой болезни была оспа, смертность от которой в период до вакцинации составляла примерно тридцать процентов; Напротив, у штамма малой натуральной оспы уровень смертности был ниже одного процента. Иоганн Юнкер, один из ведущих европейских исследователей оспы в 1700-х годах, подсчитал, что пять из каждых шести европейцев в какой-то момент своей жизни заболевали оспой, и что это уносило более 400000 жизней в Европе каждый год.
Различные методы прививки существовали в Азии почти одно тысячелетие, а турецкие методы вариоляции стали обычным явлением в Западной Европе в 1700-х годах. Они включали иммунизацию пациентов, использующих легкие дозы оспы. Однако результаты были противоречивыми и часто перерастали в тяжелые случаи оспы или даже в эпидемии. В 1790-х годах британский ученый Эдвард Дженнер заметил, что доярки выработали иммунитет против оспы, работая с коровами, инфицированными коровьей оспой. Затем Дженнер привил маленькому мальчику коровью оспу, которая вызвала легкую реакцию, была незаразной и успешно обеспечила защиту от оспы.Первоначально исследования Дженнера были отклонены, так как заражение людей коровьим заболеванием было спорным, но результаты оказались эффективными, и его работа была быстро принята медицинским сообществом.
Несмотря на это признание, многие страны часто не спешили внедрять обязательную вакцинацию: Великобритания не делала вакцинацию обязательной до 1852 года, а Франция — в 1902 году. Исландия, где треть населения умерла в результате единственной эпидемии оспы в 1707 году, была первой. стране ввести обязательную вакцинацию в 1802 г.В течение следующих двух десятилетий к нему присоединились несколько немецких и скандинавских государств, и к середине 1800-х годов уровень смертности от оспы в этих странах резко упал, особенно среди младенцев и детей (которые были наиболее восприимчивыми в предыдущие годы).
Вопреки убеждениям Дженнер вакцинация в младенчестве не гарантирует защиты на всю жизнь, и доля случаев оспы среди взрослых увеличилась. Впервые это наблюдали в немецких армиях в 1830-х и 1840-х годах, которые затем повторно вакцинировали всех призывников при зачислении на военную службу.Во французской армии не требовалось обязательной ревакцинации, а франко-прусская война привела к вспышке последней волны оспы, которая достигла уровней пандемии по всей Европе. Это привело к тому, что многие страны, такие как Германия, Великобритания и Швеция, ввели более строгие законы о вакцинации. В Исландии был зарегистрирован последний случай оспы во время этой пандемии в 1872 году, что сделало ее первой страной, успешно искоренившей болезнь в природе, а страны материка начали регистрировать свои последние случаи оспы примерно на рубеже двадцатого века.
Уровень развития многих неевропейских или неанглоязычных стран представляет трудности при попытке изучить роль, которую играла там оспа. Количество зарегистрированных случаев в странах Африки и Азии, по мнению многих, составляет небольшую часть фактических цифр, хотя они дают представление о моделях и тенденциях распространения вируса. К середине 1900-х годов оспа была ликвидирована в Европе и Северной Америке, а в 1970-х годах были зарегистрированы последние зарегистрированные случаи оспы на остальных континентах.В 1980 году Всемирная организация здравоохранения объявила, что оспа полностью искоренена, что сделало ее первой болезнью человека, ликвидированной в природе. В последние десятилетия удалось подавить несколько других болезней, таких как полиомиелит и малярия (ожидается, что в ближайшие годы обе эти болезни будут искоренены во всем мире). Оспа остается единственной болезнью человека, которую удалось искоренить, что является одним из самых значительных медицинских достижений в истории человечества.
В этом тексте представлена общая информация.Statista предполагает, что нет ответственность за полноту или правильность предоставленной информации. Из-за различных циклов обновления статистика может отображаться более свежей. данные, чем указано в тексте.
Обнаружение вируса оспы и панортопоксии с помощью анализов TaqMan для связывания 3′-малых канавок в реальном времени на платформах Roche LightCycler и Cepheid Smart Cycler
РЕЗЮМЕ
Мы разработали, оптимизировали и всесторонне протестировали несколько чувствительных и специфических реальных время ПЦР для быстрого обнаружения ДНК вируса оспы и pan -orthopox.Анализы основаны на химии связующего вещества TaqMan с 3′-малыми бороздками и проводились как на быстро меняющихся платформах Roche LightCycler, так и на Cepheid Smart Cycler. Гены гемагглютинина (HA) J7R, B9R и B10R использовали в качестве мишеней для анализов вируса натуральной оспы, а гены HA и ДНК-полимеразы-E9L использовали в качестве мишеней для анализов на вирус ортопоксии pan . Пять тестов на ортопокс-вирус были протестированы против панели ДНК ортопокс-вируса (как геномной, так и клонированной) в U.Медицинский научно-исследовательский институт инфекционных болезней армии США (USAMRIID). Результаты показали, что каждый анализ был способен обнаруживать как соответствующий клонированный ген, так и геномную ДНК. Анализы не показали перекрестной реактивности с 78 ДНК в панели перекрестной реактивности бактерий USAMRIID. Предел обнаружения (LOD) каждого анализа составлял от 12 до 25 копий целевой ДНК. Анализы также проводились с использованием слепой панели ДНК в Центрах по контролю и профилактике заболеваний (CDC) как на LightCycler, так и на Smart Cycler.Панель состояла из восьми различных изолятов вируса натуральной оспы, пяти изолятов ортопокс-вируса вируса натуральной оспы, двух изолятов вируса ветряной оспы и одного изолята вируса простого герпеса. Каждый образец был протестирован в трех экземплярах при 2,5 нг, 25 пг, 250 фг и 2,5 фг, что соответствует 1,24 × 10 7 , 1,24 × 10 5 , 1,24 × 10 3 и 1,24 × 10 1 . эквиваленты генома соответственно. Результаты показали, что каждый из пяти анализов был на 100% специфичным (без ложноположительных результатов) при тестировании с панелями USAMRIID и слепой панелью CDC.С помощью слепой панели CDC LightCycler был способен обнаруживать 96,2% ДНК вируса ортопоксии и 93,8% ДНК вируса натуральной оспы. Smart Cycler был способен обнаруживать 92,3% ДНК вируса ортопоксии и от 75 до 93,8% ДНК вируса натуральной оспы. Однако все пять анализов имели почти 100% чувствительность на обеих машинах с образцами выше LOD (> 12 копий гена). Эти ПЦР-анализы в реальном времени представляют собой набор тестов для выявления и подтверждения наличия ДНК вируса натуральной оспы. Раннее обнаружение вспышки оспы имеет решающее значение, независимо от того, является ли инцидент актом биотерроризма или случайным происшествием.
Ортопокс-вирусы — это большие вирусы с оболочкой, содержащие геномы двухцепочечной ДНК размером приблизительно от 175 000 до 225 000 пар оснований. Некоторые вирусы этого семейства являются патогенами человека, включая основной вирус натуральной оспы (возбудитель натуральной оспы) и малый вирус натуральной оспы (возбудитель аластрима), вирус оспы обезьян, вирус коровьей оспы и вирус коровьей оспы. У людей ортопоксвирусы вызывают инфекции от легких в случае вирусов оспы и коровьей оспы и некоторых штаммов вируса оспы обезьян до смертельных в случае оспы.33-я сессия Всемирной ассамблеи здравоохранения в конце десятилетней интенсивной кампании по эпиднадзору и вакцинации официально провозгласила искоренение оспы во всем мире в 1980 году. Государства-члены Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) впоследствии согласились объединить запасы вируса натуральной оспы в две части. в таких местах, как Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC), Атланта, Джорджия, и Институт вирусных препаратов, Москва, Россия, и уничтожить оставшиеся лабораторные образцы вирусов натуральной оспы.Российская коллекция была впоследствии перемещена в Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии, Новосибирск, Россия, в начале 1990-х годов. Эти запасы в справочных лабораториях ВОЗ планировалось уничтожить несколько раз, но с тех пор государства-члены Всемирной ассамблеи здравоохранения решили сохранить их на неопределенный срок, чтобы позволить разработку улучшенных вакцин, противовирусных препаратов и средств диагностики (18, 25). . Соединенные Штаты и ВОЗ серьезно обеспокоены тем, что необъявленные запасы оспы были получены террористами или правительствами-изгоями и могут быть использованы в качестве оружия массового уничтожения (6, 7, 12, 23).
В течение многих лет ПЦР-анализ ДНК ортопоксвируса основывался исключительно на трудоемком методе определения размера ампликона в агарозном геле после 2–3-часового цикла ПЦР (22, 26–29, 31). Революционный метод — анализ флуорогенной 5′-нуклеазы (ныне обычно называемый анализом TaqMan) — был разработан в 1991 г. (14) и впоследствии усовершенствован Lee et al. в 1993 г. (21). В то время как тесты TaqMan первоначально проводились в системе обнаружения нуклеиновых кислот Applied Biosystems (ABI) 7700, стали доступны системы с более быстрым циклом, в том числе Roche (Индианаполис, Индиана).) LightCycler и Cepheid (Саннивейл, Калифорния) Smart Cycler (5, 8-10, 33). Несколько статей касались общего применения технологии TaqMan PCR в реальном времени для идентификации биологических агентов (11, 13, 19), а также специально для ортопокс-вирусов (8, 16, 17, 24, 31). Химия TaqMan недавно претерпела значительные улучшения за счет добавления белка, связывающего малую бороздку (MGB) (1, 2, 20) и нефлуоресцентного тушителя (NFQ) на 5′-конце молекулы зонда. Целью этого исследования было использование химии TaqMan-MGB для улучшения нашего предыдущего анализа TaqMan, специфичного для вируса натуральной оспы (17), и разработки дополнительных тестов TaqMan-MGB на вирус натуральной оспы и pan -ортопоксвируса.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Вирусы и подготовка ДНК. Используемые ортопокс-вирусы и контроли (см. Таблицы 2 и 4) включали восемь изолятов вируса натуральной оспы и 10 различных штаммов вируса оспы верблюда, вируса коровьей оспы, вируса простого герпеса, вируса оспы обезьян, осповакцины вирус и вирус ветряной оспы. Процедуры происхождения, размножения и сбора этих вирусов задокументированы в других источниках (3, 31). Наши исследования также включали 11 изолятов вируса оспы обезьян и человека, полученных из клинических образцов во время вспышки в 1996 г. в Конго (неопубликованные данные), и четыре ДНК вируса ортопоксии, устойчивого к цидофовиру (32).Инфекционные титры вируса натуральной оспы определяли с помощью анализа бляшек и составляли от 10 8 до 10 10 БОЕ на мл. ДНК экстрагировали из инфицированных вирусом клеток, вирионов и корок с помощью набора AquaPure DNA kit, используя процедуру, немного измененную по сравнению с процедурой производителя (Bio-Rad, Hercules, CA). Вкратце, 100 мкл клеточного лизата или суспензии корок смешивали с 500 мкл лизисного буфера AquaPure, инкубировали при 55 ° C в течение 8 часов, охлаждали до 37 ° C и удаляли из лаборатории максимального содержания CDC после соответствующих тестов на безопасность.К смеси добавляли пять микролитров (12 мкг) раствора РНКазы AquaPure и инкубировали при 37 ° C в течение 5 минут. Добавляли двести микролитров раствора для осаждения белка AquaPure и перемешивали встряхиванием. Образцы центрифугировали при 13000 × g в течение 20 минут, супернатанты переносили в стерильные микроцентрифужные пробирки, добавляли 600 мкл изопропанола и осаждали ДНК центрифугированием при 13000 × g в течение 5 минут. ДНК промывали один раз 70% спиртом, суспендировали в 50 мкл буфера для гидратации ДНК AquaPure и хранили при -20 ° C до использования.
Клонирование и секвенирование генов HA, E9L, B9R и B10R. Были исследованы несколько генов-мишеней вируса натуральной оспы и вируса натуральной оспы, то есть гемагглютинин (HA) (J7R), E9L (ДНК-полимераза) и B9R-B10R. клонированные (см. Таблицу 2). Белок B9R основного вируса натуральной оспы состоит из 74 аминокислот, а B10R — из 65 аминокислот; точные функции обоих неизвестны. Фрагмент длиной 942 п.н., содержащий ген HA (J7R), амплифицировали с помощью ПЦР из вирусной геномной ДНК с использованием прямого праймера 5′-ATG ACA CGA TTG TCA ATA CTT TTG T-3 ‘и обратного праймера 5′-CTA GAC TTT GTT ТТК ТГТ ТТТ ГТА Т-3 ′.Фрагмент длиной 3015 п.н., содержащий ген E9L, был амплифицирован с помощью ПЦР из вирусной геномной ДНК с использованием прямого праймера 5’-ATG GAT GTT CGG TGT ATT AAT TGG T-3 ‘и обратного праймера 5′-TTA TGC TTC GTA AAA TGT AGG ТСТ ТГ-3 ′. Фрагмент 504 п.н. (основной вирус натуральной оспы) или 1138 п.н. (минорный вирус натуральной оспы), который содержал гены B9R и B10R, амплифицировали с помощью ПЦР из соответствующей вирусной геномной ДНК с использованием прямого праймера 5’-ATG GAC ATT TCT TAT GTT ATT AAT G-3 ‘и обратный праймер 5′-TCA AAA CGT GTA TCT CAT ATA TAC T-3’.Фрагменты клонировали в вектор pCR2.1-TOPO (Invitrogen, Carlsbad, CA) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, гены-мишени амплифицировали с помощью высокоточной ПЦР из геномной ДНК. Фрагменты ДНК выделяли на 0,8% агарозных гелях, и 2 мкл выделенного продукта ПЦР добавляли к 2 мкл вектора клонирования pCR2.1-TOPO. Смеси инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре, и по 2 мкл каждой использовали для трансформации компетентных бактерий DH5α (LacI + ) Escherichia coli , которые высевали на агар Лурия-Бертани, содержащий ампициллин (100 мкг / мл) (Sigma , Г.Louis, Mo.), IPTG (изопропил-β-d-тиогалактопиранозид) (0,5 мМ) (Sigma) и X-Gal (5-бром-4-хлор-3-индолил-β-d-галактопиранозид) (40 мкг / мл) (Sigma). Положительные клоны выявляли перевариванием рестрикционным ферментом, амплификацией вставленной ДНК с помощью ПЦР и секвенированием. Плазмидную ДНК выделяли из бактериальных культур с использованием коммерчески доступного набора (Qiagen, Валенсия, Калифорния) и измеряли по оптической плотности при 260 нм.
Секвенирование ДНК. Клоны pCR2.1, содержащие вставки HA и B9R-B10R, секвенировали на ABI (Фостер-Сити, Калифорния.) Генетический анализатор Prism 3100. Приблизительно 100 нг плазмидной ДНК использовали в качестве матрицы в реакциях готовности цикла терминатора BigDye (Applied Biosystems) в соответствии с инструкциями производителя. Клоны, содержащие вставки гена HA, секвенировали с помощью вектор-специфичного промотора T7 pCR2.1 (5′-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG-3 ‘) и обратных праймеров M13 (5′-CAG GAA ACA GCT ATG AC-3′) и Прямой (5’-AGT GAC GTC TTG TAT TTT GAT-3 ‘) и обратный (5′-TCT GTT TTG TAT TTA CGT G-3′) праймеры для генов НА, специфичные для гена HA.Клоны, содержащие вставки генов B9R-B10R большого и минорного вируса натуральной оспы, секвенировали с помощью вектор-специфичного промотора T7 и обратных праймеров M13. Кроме того, гены минорного вируса натуральной оспы B9R-B10R секвенировали с помощью B9R-B10R-специфичного прямого (5’-TCT GAT TTG GAA GCG TAT TT-3 ‘) и обратного (5′-AGT AGC GGA GGT AGT CGT CT-3’ ) праймеры для секвенирования. Все данные о последовательностях были собраны и проанализированы с помощью программного обеспечения SeqMan II (DNASTAR, Inc., Мэдисон, Висконсин).
Праймеры для ПЦР, последовательности-мишени и флуорогенные зонды.Праймеры для анализа ПЦР в реальном времени и последовательности зонда TaqMan-MGB перечислены в таблице 1. Последовательность HA была выбрана из гена HA J7R вируса натуральной оспы (номер доступа в GenBank L22579). ) и из отчета Ибрагима и др. (17). Мы также клонировали и секвенировали несколько новых фрагментов генов HA, E9L (ДНК-полимераза), B9R и B10R (таблица 2) и использовали эту новую информацию о последовательности (данные не показаны) для выполнения выравнивания генов и разработки анализа TaqMan-MGB. Все новые последовательности будут отправлены в GenBank. Всего 28 генов НА (включая 12 генов вируса натуральной оспы, 7 вирусов осповакцины и 11 генов не вируса натуральной оспы), 48 генов ДНК-полимеразы E9L (включая 39 генов вируса натуральной оспы, 1 ген вируса оспы верблюда, 1 ген вируса оспы коровьей оспы, 1 вирус оспы обезьян). ген, 1 ген вируса осповакцины, 3 гена вируса простого герпеса и 1 ген вируса ветряной оспы) и 11 фрагментов B9R-B10 (включая 8 генов основного вируса натуральной оспы и 2 гена минорного вируса натуральной оспы).Все выравнивания были выполнены с использованием OMIGA 2.0 (Accelrys, Сан-Диего, Калифорния). Области гомологии были использованы в качестве последовательностей-мишеней для анализов на вирус оспы pan , а участки негомологии были использованы в качестве мишеней для анализов, специфичных для вируса натуральной оспы. Конкретный праймер и последовательности TaqMan-MGB были разработаны с использованием Primer Express версии 2.0 для Windows (Applied Biosystems). Все праймеры были синтезированы с использованием стандартной химии фосфорамидита с синтезатором ДНК-РНК ABI 394. Зонды TaqMan-MGB также были синтезированы ABI и содержали 6-карбоксифлуоресцеин (FAM) на 5′-конце.К концу 3 ‘были добавлены NFQ и MGB.
ТАБЛИЦА 1. Последовательности праймераи TaqMan-MGB
ТАБЛИЦА 2. Панель ДНК ортопоксвирусаUSAMRIID
АнализПЦР с 5′-нуклеазой (TaqMan-MGB). После разработки программного обеспечения Primer Express версии 2.0 для анализа потенциального ортопоксвируса TaqMan-MGB. ( pan -ортопоксвирус HA-MGB и E9L3-MGB и специфичные для вируса натуральной оспы HA-MGB, B9R-MGB и B10R-MGB), мы оптимизировали каждый анализ в соответствии со стандартным протоколом, установленным отделом диагностических систем в U.Медицинский научно-исследовательский институт инфекционных болезней армии США (USAMRIID). Вкратце, потенциальные пары праймеров изначально тестировались в LightCycler с флуоресцентным красителем SYBR Green I (Roche Biochemicals). Оптимальная пара праймеров была выбрана на основе специфичности (один ампликон подходящего размера) и эффективности амплификации (наименьшее значение C t , которое определяется как цикл ПЦР в реальном времени, при котором программное обеспечение LightCycler определяет реакцию на быть положительным). Выбранная пара праймеров была затем оптимизирована до конечной концентрации (0.От 1 до 1,0 мкМ) с самым низким значением C t и имел самый высокий флуоресцентный сигнал. Затем были протестированы несколько потенциальных зондов TaqMan-MGB с оптимизированной парой праймеров, варьируя концентрации зонда и MgCl 2 . Заключительный анализ заключался в том, что с концентрациями пары праймер-зонд и условиями реакции, которые сочетают самый низкий уровень обнаружения (LOD) (количество копий гена, которое было обнаружено в анализе в 100% случаев), самый низкий C t значение и самое высокое отношение флуоресцентный сигнал / шум.LOD анализов определяли из серийных разведений как клонированных генов вируса натуральной оспы (HA, E9L, B9R и B10R), так и геномной ДНК, очищенной из вирионов вируса натуральной оспы (Индия 7125).
Все анализы проводились в объемах 20 мкл для LightCycler и 25 мкл для Smart Cycler. Каждая реакционная смесь содержала буфер для ПЦР (50 мМ Трис [pH 8,3], 25 мкг бычьего сывороточного альбумина на мл и 0,2 мМ смесь дезоксинуклеозидтрифосфата [Idaho Technology, Солт-Лейк-Сити, Юта]). ДНК-полимераза Platinum Taq (Invitrogen) при 0.К каждой реакционной смеси добавляли 8 ед. Для LightCycler и 1 ед. Для Smart Cycler. Конечные концентрации MgCl 2 , праймера и зонда для каждого анализа приведены в таблице 1. Каждая реакционная смесь Smart Cycler также содержала 1 × добавочный реагент Smart Cycler (0,2 мМ Трис [pH 8,0], 0,2 мг бычьего сывороточного альбумина на мл, 150 мМ трегалозы и 0,2% Твина 20). К каждой реакционной смеси добавляли пять микролитров контрольной или матричной ДНК. Термоциклирование для LightCycler и Smart Cycler выполняли следующим образом: один цикл при 95 ° C в течение 2 минут, затем 45 циклов при 95 ° C в течение 1 с и 60 ° C в течение 20 секунд.Показания флуоресценции снимали в конце каждого шага 60 ° C. Для LightCycler каждая реакционная капиллярная трубка считывалась в канале 1 (F1) при настройке усиления 16, при этом данные анализировались с помощью программного обеспечения для анализа данных LightCycler (версия 3.5.3). Кривые выборки анализировали с использованием максимума второй производной с установкой базовой линии на арифметическую. Для Smart Cycler данные были проанализированы с помощью программного обеспечения Cepheid Smart Cycler (версия 1.2d). Настройки Smart Cycler состояли из анализа первичной кривой с ручной настройкой порогового значения 10, включенным вычитанием фона, средним периодом времени, установленным на пять циклов, минимальным циклом фона, установленным на 5, и максимальным циклом фона, установленным на 45.
Расширенная оценка анализов. Все пять анализов были тщательно оценены, сначала против различных клонированных и геномных ДНК вирусов ортопоксии, доступных в USAMRIID (таблица 2), затем против различных штаммов и изолятов из панели ДНК бактерий перекрестной реактивности USAMRIID (1 нг каждого ДНК) (Таблица 3), и, наконец, против слепой панели ДНК вируса ортопоксии, подготовленной CDC под эгидой Межведомственной рабочей группы Министерства внутренней безопасности (OHS-IWG). Слепая панель OHS-IWG CDC состояла из 16 ДНК, перечисленных в таблице 4.ДНК представляют собой поперечное сечение различных ортопокс-вирусов из разных источников вместе с ДНК трех неортопокс-вирусов. Каждый образец (всего 20 мкл) первоначально был разбавлен 1: 2 стерильной водой для получения достаточного объема для трехкратного анализа образца для всех пяти анализов как на LightCycler, так и на Smart Cycler. По пять микролитров каждого разведения 1: 2 добавляли к мастер-миксу LightCycler (15 мкл) и к мастер-миксу Smart Cycler (260 мкл). Следовательно, после разведений 1: 2 фактическое количество ДНК, загруженное в каждую смесь для анализа, составляло 1 нг / мкл (2.5 нг), 10 пг / мкл (25 пг), 100 фг / мкл (250 фг) и 1 фг / мкл (2,5 фг). Эквиваленты генома для каждого анализа (на основе среднего размера генома ортопоксвируса 186000 п.н. и содержания GC 33%) составляли 62,5 нг = 1,24 × 10 7 геномов, 25 пг = 1,24 × 10 5 генома, 250 fg = 1,24 × 10 3 генома и 2,5 fg = 1,24 × 10 1 генома. Для слепой панели ДНК OHS-IWG CDC каждый образец (всего 68) был протестирован в трех экземплярах, а любые сомнительные результаты образцов были повторно проанализированы в трех экземплярах.Все реакции, проведенные во время тестирования закодированных образцов в CDC, включали по крайней мере один положительный контроль, который содержал 1,24 × 10 3 копий (250 фг) очищенной геномной ДНК вируса натуральной оспы (Индия 7125) и два контроля без матрицы (NTC): реагент NTC и образец NTC. Тестирование CDC длилось 3 дня (с 16 по 18 декабря 2002 г.). Неслепые результаты OHS-IWG CDC также показаны в таблице 4. Расчеты чувствительности и специфичности для панели CDC (таблица 5) были определены следующим образом: процентная чувствительность = [TP / (TP + FN)] × 100 и процент специфичности = [TN / (TN + FP)] × 100, где TP — количество истинно положительных образцов, FN — количество ложно отрицательных образцов, TN — количество истинно отрицательных образцов, а FP — количество ложных. -положительные образцы.
ТАБЛИЦА 3. ДНК панели перекрестной реактивностиUSAMRIID
ТАБЛИЦА 4.Результаты тестирования панели CDC OHS-IWG для всех пяти анализов ортопоксвируса и MGB
ТАБЛИЦА 5.Чувствительность и специфичность анализов ортопоксвируса и MGB с IWG CDC слепая панель
Все пять анализов были также протестированы на их количественную способность на LightCycler. Была сделана серия разведений как клонированной целевой ДНК, так и геномной ДНК, и были сделаны три измерения оптической плотности при 260 нм для определения концентрации каждого исходного образца ДНК.Затем каждый исходный образец готовили в виде 10-кратного серийного разведения от 5 × 10 6 до 5 копий гена на 5 мкл. Разведения проводили в трех экземплярах (клонированная ДНК) или в двух экземплярах (геномная ДНК) с каждым из пяти анализов на LightCycler с ранее описанным циклическим профилем. Программное обеспечение для анализа LightCycler версии 3.5.3 использовалось для создания кривых линейной регрессии и сопутствующих атрибутов (наклон, пересечение, ошибка и значение –) для каждого анализа. Дополнительные данные для стандартных тестов TaqMan и TaqMan-MGB на вирус оспы pan будут опубликованы в другом месте (C.А. Уайтхаус, Д. А. Кулеш, М. С. Ибрагим, Дж. Парагас и Дж. У. Хаггинс, представленные для публикации).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Разработка анализов. Конечные последовательности праймеров, последовательности зонда TaqMan-MGB и условия реакции для каждого анализа показаны в таблице 1. Анализы воспроизводимо детектируют от 0,1 до 0,2 фг плазмидной ДНК и от 5 до 10 фг геномной ДНК. ДНК, которая представляла примерно от 12 до 25 копий каждого гена соответственно. На рис. 1 показаны графики репрезентативного прогона с использованием анализа B9R-MGB с образцами геномной ДНК вируса натуральной оспы в дубликатах, а также LOD и динамический диапазон каждого анализа, полученные с клонированными генами и очищенной геномной ДНК вируса натуральной оспы на LightCycler.Данные экспериментов по LOD плазмид и геномной ДНК показали линейную корреляцию с динамическим диапазоном шести порядков величины, что составляет примерно от 25 до 2,500,000 копий.
РИС. 1.LOD и r значения линейных кривых для всех пяти анализов ортопоксвирус-MGB. Представленный график представляет результаты репрезентативного анализа с использованием анализа B9R-MGB с образцами геномной ДНК вируса натуральной оспы в двух экземплярах.
Оценки ДНК-панели USAMRIID. Каждый анализ тестировали с использованием двух панелей ДНК USAMRIID: (i) панели ДНК ортопоксвируса и (ii) панели перекрестной реактивности ДНК.Результаты в таблице 2 показывают, что анализы pan -ортопоксвируса ( pan -HA-MGB и pan -E9L3-MGB) были способны обнаруживать как клонированные, так и геномные ДНК видов ортопоксвируса, доступных в Панель USAMRIID, включающая ДНК штамма вируса осповакцины-кандидата на вакцину Ankara (который имеет одно внутреннее несоответствие оснований с прямым праймером анализа pan -HA-MGB). Результаты анализов, специфичных для вируса натуральной оспы (HA-MGB, B9R-MGB и B10R-MGB), показывают, что эти анализы были способны по-разному обнаруживать клонированные гены различных видов вируса натуральной оспы.ДНК вируса натуральной оспы не были обнаружены с помощью анализов, специфичных для вируса натуральной оспы. Все пять анализов были отрицательными (ДНК не обнаружена) для различных штаммов и изолятов (всего 78) в панели бактериальной перекрестной реактивности USAMRIID (таблица 3).
OHS-IWG CDC слепая панель ДНК. (i) LightCycler. Оба анализа pan -orthopox virus (HA-MGB и E9L3-MGB) выявляли все потенциальные положительные результаты, кроме Ботсваны (v73-225) и Parvin, в самом низком количестве (2,5 фг). Все три анализа, специфичных для вируса натуральной оспы (HA-MGB, B9R-MGB и B10R-MGB), также выявляли все потенциальные положительные результаты, кроме Ботсваны (v73-225) и Parvin, в самом низком количестве (2.5 фг). Ни в одном из пяти анализов на LightCycler не было ложноположительных результатов среди 15 образцов ДНК вируса неортопоксии. Также не было ложноположительных результатов анализов, специфичных для вируса натуральной оспы, с 25 ДНК вируса ортопоксии вируса натуральной оспы.
(ii) Smart Cycler. Для анализа HA-MGB вируса оспы pan SmartCycler обнаружил все потенциально положительные результаты, кроме Ботсваны (v73-225), Parvin, вируса коровьей оспы (CP58) и вируса оспы обезьян (v79-I). -005), все по минимальной сумме (2.5 фг). Для анализа pan -orthopox virus E9L3-MGB Smart Cycler обнаружил все потенциально положительные результаты, кроме Ботсваны (v73-225), Parvin и вируса оспы обезьян (v79-I-005), все в минимальном количестве (2,5 фг). . Для анализа HA-MGB, специфичного для вируса натуральной оспы, не было обнаружено ни одного образца на уровне 2,5 фг; для анализов B9R-MGB были обнаружены все ДНК, кроме Парвина, Афгана (var4), Непала (v73-225), Конго и Ботсваны (v73-225) (каждая при 2,5 фг) и Бангладеш (250 фг). Для B10R-MGB были обнаружены все ДНК, кроме Parvin (2.5 фг) и Бангладеш (250 фг). Удивительно, но анализы B9R-MGB и B10R-MGB обнаружили ДНК Бангладеш на уровне 2,5-фг. Среди 15 образцов ДНК вируса неортопоксии ни в одном из пяти анализов на Smart Cycler не было ложноположительных результатов. Также не было ложноположительных результатов анализов, специфичных для вируса натуральной оспы, с 25 ДНК вируса ортопоксии вируса натуральной оспы. В целом, анализ HA-MGB вируса натуральной оспы (и в меньшей степени анализ вируса натуральной оспы B9R-MGB) был значительно менее чувствителен на Smart Cycler, чем на LightCycler (таблица 5).
Количественная оценка анализа. Каждый анализ был протестирован на предмет его способности предсказывать эквивалентность генома вируса ортопоксии на LightCycler. Результаты также подтвердили LOD для каждого анализа как для клонированной ДНК, так и для геномной ДНК. Данные (рис. 1) экспериментов с плазмидой и геномной ДНК показали линейную корреляцию с динамическим диапазоном шести порядков величины, представляющим от 5 000 000 до 25 копий. Кроме того, несколько анализов показали LOD в 12 копий гена, а один анализ, B9R-MGB, смог обнаружить 5 копий гена с ДНК геномного вируса натуральной оспы.Аналогичные результаты для клонированной ДНК (LOD от 12 до 25 копий гена) были получены для Smart Cycler (данные не показаны).
ОБСУЖДЕНИЕ
Вакцинация против оспы была прекращена после искоренения вируса оспы в США и других странах в 1979 году. Однако недавние события в мире побудили вооруженные силы США начать вакцинацию войск от оспы. Наибольшее опасение вызывает то, что, несмотря на то, что оспа была искоренена в течение почти двух десятилетий, после событий 11 сентября 2001 г. вероятность биотеррористической атаки существенно возросла.Вполне возможно, что отдельное лицо или, возможно, правительство-изгой использовали свои технические знания для массового производства инфекционного вируса оспы (или его варианта, созданного с помощью генной инженерии). Поэтому крайне важно, чтобы быстрые, надежные, но простые диагностические молекулярные тесты были разработаны с использованием новейших доступных технологий обнаружения и идентификации. Мы представляем разработку и расширенную оценку пяти анализов ПЦР в реальном времени для скрининга ДНК вируса ортопоксии (анализ pan -orthopox virus) или подтверждения ДНК оспы (анализы, специфичные для вируса натуральной оспы) как на LightCycler, так и на Smart Cycler.Каждый анализ является либо улучшением предыдущего анализа ПЦР в реальном времени (вирус натуральной оспы HA-MGB) (17), либо полностью новым анализом ( pan -вирус оспы HA-MGB, pan -вирус оспы E9L3-MGB, вируса натуральной оспы HA-MGB, вируса натуральной оспы B9R-MGB и вируса натуральной оспы B10R-MGB), включающих различные последовательности-мишени гена ортопоксвируса (4, 15, 29, 30). Чтобы обеспечить разработку наиболее надежных возможных анализов, мы клонировали и секвенировали соответствующие гены из различных видов вирусов ортопокса и натуральной оспы.Кроме того, поскольку эти анализы должны были использоваться в машинах с быстрым циклом (один цикл каждые 15-20 с), праймеры были специально разработаны для ампликонов размером менее 180 п.н. Мы выбрали пары зондов праймер-TaqMan-MGB, которые продемонстрировали максимальную эффективность синтеза ампликона, наименьшее значение C t и максимальное значение LOD. Мы решили использовать технологию зондов TaqMan-MGB, поскольку она обладает значительно улучшенными гибридизационными свойствами (20). Зонды TaqMan-MGB более стабильны, демонстрируют повышенную дискриминацию рассогласования и имеют улучшенное отношение сигнал / шум благодаря использованию NFQ вместо флуоресцентного красителя TAMRA (2).Кроме того, MGB стабилизирует AT-богатые дуплексы, в результате чего увеличивается зонд T m (температура, при которой 50% олигонуклеотида отжигается с его цепью комплемента). Следовательно, зонды MGB упростили дизайн анализа для ортопокс-вирусов, которые имеют высокое отношение A / T (~ 66%) (1). Мы также улучшили исходный анализ HA вируса натуральной оспы (17), переработав стандартный зонд TaqMan в зонд TaqMan-MGB, тем самым уменьшив последовательность зонда с 26 нуклеотидов ( T m = 60.4 ° C) до 18 нуклеотидов ( T m = 69,2 ° C). Четыре других анализа были разработаны на основе химии TaqMan-MGB. Каждый анализ был разработан так, чтобы быть как можно более широким ( pan -вирус оспы MGB) или специфическим (вирус натуральной оспы MGB), но было отмечено несколько несоответствий между праймером и зондом (см. Сноски к таблице 1).
В этом исследовании LOD для каждого анализа TaqMan-MGB оценивали на LightCycler как с соответствующим образом клонированными целевыми фрагментами гена, так и с очищенной геномной ДНК вируса натуральной оспы.LOD для клонированных генов-мишеней составлял от 10 до 100 атг (от 12 до 23 копий гена), а для геномной ДНК вируса натуральной оспы — 2,5 фг (12 копий). Каждый анализ также был высоко количественным в диапазоне от 1 нг (5 × 10 6 ) до 2,4 пг (12 копий) при тестировании в LightCycler. Первоначальное тестирование ДНК (клонированных генов и геномной ДНК), доступное в USAMRIID, повысило нашу уверенность в общей специфичности каждого анализа. В то время как каждый анализ выявлял только соответствующие образцы ДНК в панели ДНК вируса ортопоксии USAMRIID, ни один из анализов не обнаруживал никаких ДНК в панели перекрестной реактивности.Эти данные показали, что все пять наших тестов TaqMan-MGB на ортопокс-вирус были высокоспецифичными и исключительно чувствительными. Кроме того, по нашему опыту, одиночное несоответствие внутренних оснований в праймере (как в прямом праймере анализа pan -HA-MGB со штаммом вируса осповакцины Ankara) переносится легче, чем любые несоответствия в праймере TaqMan-MGB. зонд. Поэтому анализ HA-MGB вируса натуральной оспы следует использовать с осторожностью и в сочетании с анализами B9R-MGB и B10R-MGB при использовании для проверки ДНК вируса оспы.
В CDC анализы проводились с использованием слепой панели из смеси 68 различных образцов (16 различных типов ДНК в четырех различных концентрациях и вода). Результаты показывают, что наши анализы были не только высокоспецифичными (не было ложноположительных результатов с ДНК вируса ветряной оспы или вируса простого герпеса), но и высокочувствительными (большая часть 2,5 фг [12 копий гена] была обнаружена LightCycler). Примечательно, что два образца, пропущенные всеми пятью анализами на LightCycler, были 2.5-фг (12 копий гена) лизата вирусных клеток и первичной клинической корки (Парвин). Каждый из этих образцов был получен либо из лизата клеточной культуры, либо из ткани, инфицированной вирусом натуральной оспы; таким образом, материал образца содержал расчетное количество (вероятно, менее 2,5 фг) вирусной ДНК, смешанной с фоновой клеточной ДНК. В Smart Cycler результаты анализа были более вариабельными (с помощью анализа HA-MGB вируса натуральной оспы не было обнаружено ни одного образца с концентрацией 2,5 фг, тогда как другие тесты показали меньшую чувствительность для некоторых образцов с низким уровнем [2.5 фг]). Наблюдение, что Smart Cycler пропустил образец 839 (Бангладеш при 250 фг; 1240 копий гена), но обнаружил более низкие уровни того же образца (2,5 фг; 12 копий гена) с помощью анализов B9R-MGB и B10R-MGB, в настоящее время необъяснимо. Эти результаты также подтверждают наши предыдущие результаты (неопубликованные данные) о том, что использование зонда TaqMan-MGB вместо стандартного зонда TaqMan не привело к значительному изменению чувствительности анализа на LightCycler или Smart Cycler. Однако использование датчиков TaqMan-MGB действительно увеличивает надежность сигнала (больше флуоресценции) на LightCycler, вероятно, потому, что NFQ является лучшим гасителем сигнала, чем TAMRA, установленный на стандартных датчиках TaqMan.Этот эффект наблюдается только на LightCycler. В целом специфичность пяти анализов на обеих платформах со всеми слепыми образцами OHS-IWG CDC составила 100%. Чувствительность для всех образцов CDC с пятью анализами на LightCycler составляла от 93,8 до 96,2%, а на Smart Cycler — от 75 до 93,8%. Наибольшая разница в чувствительности была с анализами HA-MGB вируса натуральной оспы на Smart Cycler. Во избежание ложноотрицательных результатов этот анализ не следует запускать в его нынешней конфигурации на Smart Cycler, если есть подозрение на разбавленный образец.
Недавние мировые события привлекли внимание к необходимости создания животной модели оспы (натуральной оспы) для тестирования новых и улучшенных вакцин и противовирусных соединений. Jahrling et al. (неопубликованные данные) недавно разработали модель обезьяны для изучения прогрессирования инфекций оспы. В этих экспериментах количественный анализ HA-MGB ортопоксвируса пан-, представленный здесь, был использован для мониторинга вирусной нагрузки в крови и тканях обезьян после заражения оспой. Планируются дальнейшие исследования консервированных тканей обезьяны с помощью других четырех количественных анализов.Кроме того, инфекции оспы обезьян являются важной суррогатной моделью инфекций оспы человека (34). Анализ HA-MGB ортопоксвируса pan- использовался для мониторинга в реальном времени вирусной нагрузки у обезьян, получавших плацебо и цидофовир, зараженных вирусом оспы обезьян (неопубликованные данные).
Кроме того, во время операции «Благородный орел» (с 11 сентября 2001 г. по 15 мая 2002 г.) было проведено более 12 500 аналогичных анализов НА без MGB pan- ортопоксвируса (праймеры, идентичные праймерам в Таблице 1 с немного более длинным «стандартным» Зонд TaqMan [6’FAM-AGT GCT TGG TAT AAG GAG CCC AAT TC-TAMRA-3 ‘]) запускали на многочисленных образцах окружающей среды в Ruggedized Advanced Pathogen Identification Device (RAPID) (Idaho Technology) в USAMRIID.RAPID — это улучшенная версия LightCycler с немного другим программным обеспечением. Было приблизительно 50 ложноположительных результатов (специфичность 99,6%), все из которых были отрицательными в отношении ДНК вируса ортопоксии при повторном скрининге. Анализ также обнаружил 98,5% всех контрольных образцов с положительной концентрацией ДНК вируса коровьей оспы, которые были приготовлены для каждой партии образцов, обработанных для ПЦР в реальном времени. Кроме того, с 16 мая по 24 сентября 2002 года Исследовательский институт Среднего Запада (Роквилл, штат Мэриленд) проанализировал более 15000 образцов на ПЦР пан- ортопоксвируса-HA на RAPID и обнаружил только два ложноположительных результата (которые были отрицательными при повторном скрининге). (неопубликованные данные).
В заключение, этот отчет демонстрирует надежную и специфическую идентификацию ДНК ортопоксвируса из окружающей среды, клинических и инфицированных вирусами культур клеток с помощью TaqMan-MGB ПЦР в реальном времени как на LightCycler, так и на Smart Cycler. Используя эти анализы в качестве набора тестов ПЦР, можно легко установить присутствие ДНК вируса ортопоксии в образце, а затем быстро и точно определить, принадлежит ли ДНК вирусу оспы, используя три подтверждающих анализа ПЦР.
БЛАГОДАРНОСТИ
Мы благодарим Джона П.Кондигу за его отличную техническую помощь в работе по секвенированию и Джеффри Гаррисону за его техническую помощь в оптимизации и тестировании тестов на вирус ортопоксии. Мы также благодарим Эрика Хенчала, Рэндала Шоппа, Мелани Ульрих и Кэтрин Кеньон (USAMRIID, Форт-Детрик, штат Мэриленд) за рецензирование рукописи, Софи Ибрагим за доступ к последовательностям гена HA ортопокс-вируса, а также Ингер Дэймон, Расс Регнери и остальная часть их группы Pox в CDC для подготовки образцов ДНК ортопоксического и неортопоксического вирусов для расширенной оценки анализа OHS-IWG.
Мнения, интерпретации, выводы и рекомендации принадлежат авторам и не обязательно поддерживаются армией США.
Описанное здесь исследование спонсировалось DTO CB.26.J00, Командование медицинских исследований и материально-технического снабжения армии США (план / контракт № DTO1-18)
СНОСКИ
- Получено 26 апреля 2003 г.
- Возвращено для модификация 2 августа 2003 г.
- Принята 8 ноября 2003 г.
- Авторские права © 2004 Американское общество микробиологии
ССЫЛКИ
- 1.№
Афонина И., Зиварц М., Кутявин И., Лухтанов Э., Гампер Х., Мейер Р. Б.. 1997. Эффективное праймирование ПЦР короткими олигонуклеотидами, конъюгированными с связывающим веществом малой бороздки. Nucleic Acids Res.25 : 2657-2660.
- 2.↵
Афонина И.А., М.В. Рид, Э. Лусби, И.Г. Шишкина, Ю.С. Белоусов. 2002. ДНК-зонды, конъюгированные со связыванием малых бороздок, для количественного определения ДНК с помощью флуоресценции, запускаемой гибридизацией.BioTechniques32 : 940-949.
- 3.
Бейкер Р. О., М. Брей и Дж. У. Хаггинс. 2003. Возможные противовирусные препараты для лечения натуральной оспы, оспы обезьян и других ортопоксвирусных инфекций. Antiviral Res.57 : 13-23.
- 4.↵
Beaud, G. 1995. Репликация ДНК вируса осповакцины: краткий обзор. Biochimie77 : 774-779.
- 5.↵
Белэнджер, С.Д., М. Буассино, К. Менар, Ф. Ж. Пикар и М. Г. Бержерон. 2002. Быстрое обнаружение бактерий, продуцирующих токсин шига, в фекалиях с помощью мультиплексной ПЦР с молекулярными маяками на Smart Cycler. J. Clin. Microbiol. 40 : 1436-1440.
- 6.↵
Berche, P. 2001. Угроза оспы и биотерроризма. Trends Microbiol.9 : 15-18.
- 7.↵
Бреман, Дж. Г. и Д. А. Хендерсон. 2002. Диагностика и лечение оспы.N. Engl. J. Med. 346 : 1300-1308.
- 8.↵
Эспи, М. Дж., Дж. Р. Уль, П. С. Митчелл, Дж. Н. Торвилсон, К. А. Свен, А. Д. Уолд и Т. Ф. Смит. 2000. Диагностика вирусных инфекций простого герпеса в клинической лаборатории методом LightCycler PCR. J. Clin. Microbiol.38 : 795-799.
- 9.
Эспи, М. Дж., Дж. Р. Уль, Л. М. Слоан, Дж. Э. Розенблатт, Ф. Р. Кокерилл III и Т. Ф. Смит. 2002 г.Обнаружение вируса осповакцины, вируса простого герпеса, вируса ветряной оспы и Bacillus anthracis ДНК с помощью полимеразной цепной реакции LightCycler после автоклавирования: последствия для биобезопасности агентов биотерроризма. Mayo Clin. Proc.77 : 624-628.
- 10.↵
Хирпс, А., З. Чжан и С. Александерсен. 2002. Оценка портативного устройства ПЦР в реальном времени Cepheid SmartCycler для быстрой диагностики ящура. Вет.Рек. 150 : 625-628.
- 11.↵
Henchal, E. A., and M. S. Ibrahim. 2003. Оценка методов полимеразной цепной реакции для идентификации биологических агентов, с. 239-249. В P. J. Stoppa и M. Bartoszcze (ред.), Экспресс-методы анализа биологических материалов в окружающей среде. Kluwer Academic Publishing, Амстердам, Нидерланды.
- 12.↵
Хендерсон, Д. А., Т. В. Инглесби, Дж. Г.Бартлетт, М.С. Ашер, Э. Эйтцен, П.Б. Ярлинг, Дж. Хауэр, М. Лейтон, Дж. Макдейд, М.Т. Остерхольм, Т. О’Тул, Г. Паркер, Т. Перл, П.К. Рассел, К. Тонат и др. . 1999. Оспа как биологическое оружие: управление медициной и общественным здравоохранением. JAMA281 : 2127-2137.
- 13.↵
Хиггинс, Дж. А., М. С. Ибрагим, Ф. К. Кнауэрт, Г. В. Людвиг, Т. М. Кийек, Дж. В. Эзцелл, Б. К. Кортни и Э. А. Хенчал. 1999. Чувствительная и быстрая идентификация агентов биологической угрозы.Анна. N.Y. Acad. Sci. 894 : 130-148.
- 14.↵
Холланд, П. М., Р. Д. Абрамсон, Р. Уотсон и Д. Х. Гельфанд. 1991. Обнаружение специфического продукта полимеразной цепной реакции с использованием 5′-3′-экзонуклеазной активности ДНК-полимеразы Thermus aquaticus. Proc. Natl. Акад. Sci. USA88 : 7276-7280.
- 15.↵
Ховард, С. Т., Ю. С. Чан и Г. Л. Смит. 1991. Гомологи вируса коровьей оспы белка инвертированных концевых повторов вируса фибромы Шопе и прерывистая ORF, относящаяся к семейству рецепторов фактора некроза опухоли.Вирусология 180 : 633-647.
- 16.
Ибрагим, М. С., Дж. Дж. Эспозито, П. Б. Джарлинг и Р. С. Лофтс. 1997. Потенциал 5′-нуклеазной ПЦР для обнаружения одноосновного полиморфизма в ортопоксвирусе. Мол. Ячейки зонды.11 : 143-147.
- 17.↵
Ибрагим, М. С., Д. А. Кулеш, С. С. Салех, И. К. Дэймон, Дж. Дж. Эспозито, А. А. Шмальджон и П. Б. Джарлинг. 2003. Анализ ПЦР в реальном времени для обнаружения вируса оспы.J. Clin. Microbiol.41 : 3835-3839.
- 18.↵
Джоклик, В. К., Б. Мосс, Б. Н. Филдс, Д. Х. Бишоп и Л. С. Сандахчиев. 1993. Почему нельзя уничтожать запасы вируса оспы. Science262 : 1225-1226.
- 19.↵
Krafft, A. E., and D. A. Kulesh. 2001. Применение молекулярно-биологических методов для обнаружения биологических агентов. Clin. Lab Med.21 : 631-660.
- 20.№
Кутявин И.В., Афонина И.А., Миллс А., Горн В.В., Лухтанов Е.А., Белоусов Е.С., Зингер М.Дж., Уолбургер Д.К., Лохов С.Г., Галл А.А., Демпси Р., Рид М.В., Мейер Р.Б., Хеджпет Дж. . 2000. ДНК-зонды, связывающие 3′-малую бороздку, повышают специфичность последовательности при температурах удлинения ПЦР. Nucleic Acids Res.28 : 655-661.
- 21.↵
Ли, Л. Г., К. Р. Коннелл и У. Блох. 1993. Дискриминация аллелей с помощью ник-трансляционной ПЦР с флуорогенными зондами.Nucleic Acids Res.21 : 3761-3766.
- 22.↵
Лопарев В. Н., Р. Ф. Массунг, Дж. Дж. Эспозито и Х. Мейер. 2001. Обнаружение и дифференциация ортопоксвирусов Старого Света: полиморфизм длины рестрикционного фрагмента области гена crmB . J. Clin. Microbiol.39 : 94-100.
- 23.↵
Лютвик, Л. И., Б. Гузнер и Э. Бурк. 2002. Биотерроризм: учебник за 2002 год. Дж.Доц. Акад. Незначительный. Phys.13 : 9-13.
- 24.↵
Маккей И. М., К. Э. Арден и А. Ницше. 2002. ПЦР в реальном времени в вирусологии. Nucleic Acids Res.30 : 1292-1305.
- 25.↵
Махи, Б. В., Дж. У. Алмонд, К. И. Бернс, Р. М. Чанок, Д. К. Львов, Р. Ф. Петтерссон, Х. Г. Шацмайр и Ф. Феннер. 1993. Остающиеся запасы вируса оспы должны быть уничтожены. Science262 : 1223-1224.
- 26.↵
Мейер, Х., Х. Нойбауэр и М. Пфеффер. 2002. Амплификация «специфичных к вирусу натуральной оспы» последовательностей в изолятах вируса коровьей оспы Германии. J. Vet. Med. B49 : 17-19.
- 27.
Мейер, Х., М. Пфеффер и Х. Дж. Рзиха. 1994. Изменения последовательностей внутри и ниже генов белка включения А-типа позволяют дифференцировать виды ортопоксвирусов с помощью полимеразной цепной реакции. J. Gen. Virol.75 : 1975–1981.
- 28.
Нойбауэр, Х., М. Пфеффер и Х. Мейер. 1997. Специфическое обнаружение вируса оспы мышей методом полимеразной цепной реакции. Lab Anim.31 : 201-205.
- 29.
Нойбауэр, Х., У. Рейшль, С. Ропп, Дж. Дж. Эспозито, Х. Вольф и Х. Мейер. 1998. Специфическое обнаружение вируса оспы обезьян с помощью полимеразной цепной реакции. J. Virol. Методы74 : 201-207.
- 30.↵
Price, N., D. C. Tscharke, and G. L. Smith. 2002. Белок B9R вируса осповакцины представляет собой внутриклеточный белок массой 6 кДа, который не является необходимым для репликации вируса и вирулентности. J. Gen. Virol. 83 : 873-878.
- 31.
Ропп, С. Л., К. Джин, Дж. К. Найт, Р. Ф. Массунг и Дж. Дж. Эспозито. 1995. Стратегия ПЦР для идентификации и дифференциации оспы и других ортопоксвирусов. J. Clin. Microbiol.33 : 2069-2076.
- 32.
Сми, Д. Ф., Р. В. Сидвелл, Д. Кефовер, М. Брей и Дж. У. Хаггинс. 2002. Характеристика штаммов дикого типа и устойчивых к цидофовиру вирусов оспы верблюдов, коровьей оспы, оспы обезьян и осповакцины. Противомикробный. Агенты Chemother.46 : 1329-1335.
- 33. 10
Уль, Дж. Р., К. А. Белл, Л. М. Слоан, М. Дж. Эспи, Т. Ф. Смит, Дж. Э. Розенблатт и Ф. Р. Кокерилл III. 2002. Применение быстрой полимеразной цепной реакции в реальном времени для обнаружения микробных патогенов: экспресс-тест Майо-Роша на сибирскую язву.Mayo Clin. Proc.77 : 673-680.
- 34.
Zaucha, G.M., P. B. Jahrling, T. W. Geisbert, J. R. Swearengen и L. Hensley. 2001. Патология экспериментальной аэрозольной инфекции вируса оспы обезьян у яванских макак (Macaca fascicularis). Лабораторные исследования 81 : 1581-1600.
США продвигаются вперед, создавая запасы второго противовирусного препарата против оспы
Министерство здравоохранения и социальных служб США (HHS) объявило о намерении закупить до 1 штуки.7 миллионов курсов бринцидофовира для лечения лиц с симптомами натуральной оспы.
Контракт с Chimerix, Inc. имеет общую оценочную базовую стоимость в 100 миллионов долларов и ожидаемый период в 5 лет, начиная с сентября 2015 года. Это усилие включает три однолетних варианта, которые могут увеличить общую сумму покупки до максимального количества 1,7 миллиона курсов лечения бринцидофовиром, общая стоимость контракта оценивается в 435 миллионов долларов.
Усилия контролируются канцелярией секретаря HHS, помощником секретаря по готовности и реагированию (ASPR), Управлением перспективных биомедицинских исследований и разработок (BARDA), Отделом химических, биологических, радиологических и ядерных контрмер (CBRN).
В дополнение к курсам лечения, контракт будет поддерживать клиническую и нормативную деятельность, которая может потребоваться для утверждения FDA бринцидофовира для лечения оспы.
С 2011 года BARDA поддерживает разработку двух противовирусных препаратов с различными механизмами действия против оспы, чтобы минимизировать потенциал противовирусной устойчивости и обеспечить надежную доступность контрмер в чрезвычайной ситуации.
В феврале 2011 года HHS / ASPR / BARDA заключила с Chirnerix конкурентный контракт на передовые исследования и разработки (HHS010020l 100013C) в рамках своего широкого объявления о продолжении разработки бринцидофовира для лечения оспы.
В мае 2011 года был направлен запрос, и с SIGA Technologies был заключен контракт (HHS0100201100001C) на закупку и поставку 1,7 миллиона курсов лечения ST-246 в Стратегический национальный запас (CDC / SNS) для лечения оспы. Сегодня SIGA продолжает поставлять ST-246 для CDC / SNS.
За последние четыре года был достигнут значительный прогресс. В декабре 2011 г. было проведено совещание Консультативного комитета FDA по натуральной оспе, чтобы дать рекомендации по научным и нормативным путям разработки противовирусных препаратов для оспы.Комитет признал ограничения в существующих моделях животных и предоставил как Chimerix, так и SIGA рекомендации относительно конкретных моделей животных, которые будут поддерживать одобрение продукта.
«В результате программа сейчас продвинулась до точки, когда уместно рассмотреть вопрос о закупках», — говорится в сообщении.
Эти два разных лечения нацелены на ортопокс-вирусы по-разному. В случае устойчивости к одному препарату или если один препарат противопоказан отдельному пациенту, будет доступен второй вариант.Кроме того, возможно использование двух препаратов в комбинации для улучшения результатов лечения.
ST-246 работает путем нацеливания на продукт гена F1 3L (коровьей оспы), который кодирует белок периферической мембраны 37 кДа, высоко консервативный среди поксвирусов. Лекарство препятствует роли белка Fl3L на этапе обертывания мембраны, необходимом для выхода вируса из инфицированной клетки.
Бринцидофовир действует по-другому. Бринцидофовир представляет собой липидный конъюгат цидофовира, который внутриклеточно превращается в активный противовирусный дифосфат цидофовира.3 Цидофовира дифосфат блокирует репликацию вирусной ДНК, действуя как терминатор цепи при включении вирусными ДНК-полимеразами в вирусы дцДНК. In vitro он показал активность широкого спектра в ряде семейств вирусов дцДНК, включая аденовирусы, герпесвирусы, папилломавирус, полиомавирус и ортопоксвирусы.
Бринцидофовир в настоящее время разрабатывается для лечения вирусных инфекций дцДНК у лиц с тяжелым иммунодефицитом. Эти инфекции обычно возникают после гемопоэтических (т.е. костного мозга) или трансплантации твердых органов. В настоящее время препарат находится на стадии III клинической разработки для профилактики цитомегаловирусной (ЦМВ) инфекции.
С февраля 2011 года HHS / ASPR / BARDA финансирует Chimerix для разработки бринцидофовира для лечения натуральной оспы в рамках контракта на передовые исследования и разработки. На сегодняшний день бринцидофовир продемонстрировал активность против натуральной оспы в культуре тканей и защитную эффективность у животных, инфицированных вирусами эктромелии, кроличьей оспы, коровьей оспы или коровьей оспы.
|
История вакцины
Благодаря многолетним медицинским исследованиям и обоснованно крупным инвестициям со стороны правительств мира наши возможности по производству вакцины от ряда болезней значительно улучшились.
Современные вакцины на протяжении многих лет помогли спасти бесчисленное количество жизней, а также улучшить качество жизни людей за счет уменьшения выраженности их симптомов.
В этом блоге мы кратко рассмотрим историю прививок, то, как они помогали людям на протяжении многих лет и как они работают.
НачалоБольшинство из нас уже привыкли к современным вакцинам; тем не менее, элементарные прививки на самом деле относятся к 17 – годам.
Родившийся в мае 1749 года английский доктор Эдвард Дженнер считается многими отцом вакцинологии после того, как его попытка вылечить маленького ребенка от коровьей оспы оказалась успешной в получении иммунитета против вируса.
Дженнер обеспечила иммунитет 8-летнему Джеймсу Фиппсу, извлекая гной у пострадавшего от коровьей оспы и вводя его в руку ребенку.
Этот, казалось бы, простой процесс ознаменовал то, что сейчас считается началом вакцинологии, доказав, что пациенты могут быть иммунизированы, подвергая их небольшому количеству самой болезни (хотя и в несколько иной форме).
Доказанный тезис Дженнер был во многом вдохновлен историей местных доярок, которые избежали заражения оспой из-за того, что ранее заразились коровьей оспой.
Оспа — это заболевание, которое может быть изнурительным и даже смертельным, в то время как у людей коровья оспа протекает гораздо менее серьезно.
Он использовал информацию об устойчивости доярки к натуральной оспе и применил ее на практике, что в конечном итоге привело к полному искоренению оспы примерно двумя веками позже, в 1979 году.
К счастью, этот же принцип можно использовать для обеспечения иммунитета против других болезней.
Как действует вакцинация
Проще говоря, вакцинация работает путем медленного введения в организм человека определенного заболевания в виде ослабленного или даже мертвого антигена (вещества, которое вызывает реакцию иммунной системы организма).
Этот антиген не способен запустить развитие рассматриваемого заболевания или вируса, но одного его присутствия достаточно, чтобы вызвать реакцию нашего организма.В данном случае эта реакция — выработка антител.
Антитела вырабатываются, когда в нашем организме обнаруживаются антигены и другие угрозы, и они работают над их расщеплением, чтобы предотвратить нанесение нам вреда от неприятных инфекций.
После вакцинации человека и обработки ослабленного антигена у многих антител истечет срок годности, однако существуют также «клетки памяти», которые остаются еще долгое время.
В следующий раз, когда организму угрожает реальный (или «активный») антиген, эти клетки памяти позволяют иммунной системе вырабатывать антитела гораздо быстрее и устранять угрозу, прежде чем она станет проблемой.
Без вакцинации иммунная система часто не может вырабатывать антитела достаточно быстро, чтобы бороться с внешними угрозами, и именно тогда болезни начинают развиваться и преобладать.
Современные дниСо времени революционной работы Дженнера в 17 – годах вакцинология значительно продвинулась вперед, и теперь доступны вакцины от таких болезней, как полиомиелит, краснуха, гепатит В и многих других.
Хотя у вакцинологов всегда будет больше работы (в настоящее время полностью искоренены только две болезни), мы должны быть благодарны за то, что живем в эпоху, когда многие из самых смертоносных вирусов в мире теперь поддаются лечению.
Даже для болезней, для которых в настоящее время отсутствует полноценная вакцина (таких как грипп и туберкулез), все еще существует множество частично эффективных методов лечения, которые могут помочь облегчить симптомы.
Текущие исследования в области вакцинологии помогают защищать жизни миллионов людей каждый год, и только благодаря искоренению оспы ежегодно спасается около 5 миллионов жизней.
Solent Scales предоставляет широкий спектр услуг для промышленного весового оборудования, включая поставку, аренду и калибровку.
Узнайте больше о наших услугах, нажав здесь.
Данные по оспе в Лондоне за 300 лет могут дать представление о коронавирусе
Что 300 лет эпидемии оспы в Лондоне могут рассказать нам о Covid-19: заражение небольшим количеством вируса может УЛУЧШИТЬ выживаемость — и может быть полезным побочным эффектом ношения масок
- Исследователи из Канады проанализировали смерть в Лондоне записи за 1664–1930 гг.
- Это охватывало введение медико-санитарных мер, вариоляцию и вакцинацию
- Период закончился последним случаем смертельной болезни и рубцевания в городе
- Вариация увидела людей, которым были привиты маленькие количество вируса от инфицированного
- Процедура, которая имела риски при ее использовании против оспы, была отменена
- Эксперты заявили, что ношение масок может помочь безопасно противостоять COVID-19
Ян Рэндалл Для Mailonline
Опубликовано: | Обновлено:
Инфекция небольшим количеством вируса — например, может быть побочным эффектом ношения масок — может улучшить показатели выживаемости при эпидемии, как показало историческое исследование.
Исследователи из Гамильтона, Канада, изучили тысячи еженедельных отчетов с подробным описанием случаев смерти от оспы в Лондоне за период с 1664 по 1930 годы.
Их результаты позволяют по-новому взглянуть на развитие инфекционных заболеваний, показывая, как изменение условий повлияло на частоту и тяжесть вспышек.
Оспа, которая убила 30 процентов инфицированных и позволила ослепить или обезобразить многих других, была одним из самых разрушительных вирусов, поразивших человечество.
Заболевание первоначально вызывало лихорадку и рвоту, затем язвы во рту, кожную сыпь и, наконец, характерные волдыри с ямочками, которые покрываются коркой и оставляют рубцы.
Это одна из двух болезней, которые когда-либо были успешно искоренены — вторая — чума крупного рогатого скота, которая поражает крупный рогатый скот и, таким образом, влияет на запасы пищи для людей.
Исследователи из Гамильтона, Канада оцифровали и изучили тысячи еженедельных отчетов о смертях от оспы в Лондоне за период с 1664 по 1930 годы, изображенных выше
‘Текущая пандемия COVID-19 вызвала всплеск интереса к изучению передачи инфекционных заболеваний и как меры общественного здравоохранения могут изменить ход пандемии », — сказал математик Дэвид Эрн из Университета Макмастера.
«Наша цель состояла в том, чтобы описать и сделать общедоступными еженедельные временные ряды смертности от оспы в Лондоне — и выявить исторические события, которые могли повлиять на динамику оспы на протяжении веков».
В своем исследовании профессор Эрн и Ольга Крылова, также из McMaster, оцифровали более 13000 еженедельных отчетов о смертности от оспы, которые были опубликованы в лондонских сводках смертности и еженедельных отчетах Генерального регистратора за период с 1664 по 1930 год. эра, начавшаяся до того, как появились какие-либо формы общественного здравоохранения, до введения как вариоляции, так и более поздней вакцинации — и завершилась окончательной смертью от оспы в Лондоне.
Вариация — это процедура, при которой врачи пытались привить здоровых людей, подвергая их воздействию вируса оспы, взятого из пустулы или сухой парши инфицированного человека, а не более мягкого вируса коровьей оспы, на котором позже была основана вакцина.
«За период времени, охватываемый данными, оспа превратилась из ужасающей и неизбежной опасности в инфекцию, которую легко предотвратить», — сказал профессор Эрн.
«Введение более эффективных мер контроля, особенно вакцинации, естественным образом привело к снижению смертности от оспы и, в конечном итоге, к ее искоренению.«
Доктор Крылова добавила:« Совершенно очевидно, что введение мер борьбы с оспой — вариоляция, а затем вакцинация — сделало возможным ее искоренение ».
«Наш анализ также показывает, что более широкое использование мер контроля и изменения в политике общественного здравоохранения коррелировали с изменениями частоты эпидемий», — сказала она.
От практики вариоляции оспы отказались, поскольку она может привести к серьезным и смертельным инфекциям и вызвать новые эпидемические вспышки.
Однако эксперты недавно предположили, что вариоляция с небольшим количеством вируса, стоящего за COVID-19, может быть полезным побочным эффектом использования масок для лица.
Дуэт оцифровал более 13000 еженедельных отчетов о смертности от оспы, которые были опубликованы в лондонских сводках смертности и еженедельных отчетах генерального регистратора с 1664 по 1930 год. Великая лондонская чума. Перечислены пять смертей от вируса гриппа и оспы. сдвиги.
«Необходимы дальнейшие исследования с использованием математических моделей для количественной оценки воздействия вмешательств и исторических событий на вспышки оспы», — добавила д-р Крылова.
Полные результаты исследования были опубликованы в журнале PLOS Biology.
ОСПА: ИСТОРИЯ ВИРУСА-УБИЙЦА
- Первой известной жертвой оспы был египетский фараон Рамзес V, умерший в 1157 году до н.э., и чья мумия до сих пор носит шрамы от этой болезни.
- Когда испанцы захватили его в Эспаньолу (ныне Гаити и Доминиканская Республика), которую они заселили плантацией сахарного тростника в 1509 году, он убил каждого из двух.5 миллионов туземцев за десятилетие.
- Более 200 лет назад врач Эдвард Дженнер сделал важное открытие, которое привело к созданию первой вакцины. Он обнаружил, что доярки, которые заболели коровьей оспой из-за ежедневной работы рядом с животными, были защищены от оспы, человеческой формы болезни.
- В Великобритании болезнь носила эндемический характер до 1935 года.
- Последняя крупная вспышка в Европе произошла в 1972 году, когда 20 миллионов были вакцинированы после того, как паломник, вернувшийся в Югославию из Мекки, заразил 175 человек.