Frap: FRAP — Настоящее немецкое качество

сантехника в Краснодаре от производителя Frap. Ванны, душевые кабины, унитазы, раковины, смесители, мебель для ванной

Смесители для ванной с более чем десятилетней историей, вот, что представляет собой имя «FRAP». Данная продукция выдержала рыночную конкуренцию благодаря качественному исполнению, а также необычному, авангардному дизайну, который так близок нынешнему времени. Помимо отличного разнообразия моделей, самых различных форм и размеров, вы получите гарантированно качественный и долговечный смеситель с историей, подтверждающей любовь и доверие покупателей.

Мы готовы вам предложить выгодные цены на смесители для раковины и ванны, ведь наш магазин сантехники всегда предлагает лучший выбор качественных и проверенных товаров. Невысокие цены, совершенный дизайн, долговечность и красота делает смесители бренда «FRAP» прекрасным выбором для вашего дома.

Модель: H76 F1076
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину

Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 366р.

Модель: H81 F1081
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

2 860р.

Модель: H64 F1064
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

2 860р.

Модель: H79 F1079
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 300р.

Модель: H80 F1080
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 300р.

Модель: h31 F1021
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

2 530р.

Модель: h40-4 F1030-4
Тип: смеситель для раковины
Цвет: бронза
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 300р.

Модель: H72 F1072
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину

Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 190р.

Модель: H73 F1073
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 080р.

Модель: H68 F1068
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

2 640р.

Модель: H65 F1065
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

2 750р.

Модель: H70 F1070
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

2 860р.

Модель: h29-4 F1019-4
Тип: смеситель для раковины
Цвет: бронза
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 300р.

Модель: H63 F1063
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

2 530р.

Модель: h41 F1031
Тип: смеситель для раковины
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

2 310р.

Модель: F511-1
Тип: сенсорный смеситель со смешиванием
Электропитание: от сети 220V 
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

7 475р.

Модель: F512-1
Тип: сенсорный смеситель со смешиванием
Электропитание: от сети 220V 
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 900р.

Модель: h41 F3231

Тип: смеситель для ванны
Цвет: белый
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 840р.

Модель: H63 F3063
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

4 560р.

Модель: h29-4 F3019-4
Тип: смеситель для ванны
Цвет: бронза
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

4 560р.

Модель: H70 F3070
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

4 800р.

Модель: H65 F3065
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

5 040р.

Модель: H68 F3268
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

5 280р.

Модель: H73 F3273
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

5 760р.

Модель: H72 F3272
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 000р.

Модель: h40-4 F3030-4
Тип: смеситель для ванны
Цвет: бронза
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 360р.

Модель: h31 F1221
Тип: смеситель с бидеткой
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на раковину
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 740р.

Модель: h31 F1121
Тип: смеситель на ванну
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на ванну врезной
Страна: Китай
Производитель: FRAP

10 560р.

Модель: F3080
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

5 640р.

Модель: F3079
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 000р.

Модель: F3064
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

5 760р.

Модель: F3081
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 120р.

Модель: F3076
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 000р.

Модель: F2202
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 840р.

Модель: F2228
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

4 080р.

Модель: F2231
Тип: смеситель для ванны
Цвет: белый/ хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

3 600р.

Модель: F2280
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

5 400р.

Модель: F2276
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

7 200р.

Модель: F2164
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 360р.

Модель: H72 F2272
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 000р.

Модель: H73 F2273
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

5 616р.

Модель: h40-4 F2230-4
Тип: смеситель для ванны
Цвет: бронза
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 600р.

Модель: F2281
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 360р.

Модель: H68 F2168
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

4 800р.

Модель: F2279
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

6 480р.

Модель: H65 F2165
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

5 040р.

Модель: F2207
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

4 464р.

Модель: h31 F2221
Тип: смеситель для ванны
Цвет: хром
Материал: латунь
Монтаж: на стену
Страна: Китай
Производитель: FRAP

4 704р.

О бренде Frap/Фрап (Китай). История бренда сантехники Frap.

Сантехника Frap

Смесители Frap – это сантехника, которая пользуется популярностью среди покупателей и уже давно известна как отличный пример оптимального соотношения цены и качества. Эти смесители приобрели такую популярность, благодаря разнообразию вариантов дизайна и доступной цене. Родиной бренда можно назвать Россию, но производство смесителей Frap расположено в Китае.

Продукция Frap изготовлена в соответствии с европейским стандартом CE и с международным стандартом ISO. Смесители данного бренда выпускаются в двух вариантах: стандарт и люкс. Смесители Фрап люкс-класса выполнены из высококачественного медного сплава по итальянской технологии отлива «IMR».

Отличительной особенностью Frap можно назвать разнообразие вариантов дизайна и расцветки. В коллекциях представлены ретро-смесители, смесители, выполненные в современной стилистике, сенсорные модели, классические варианты. В каждой коллекции предлагается смеситель для кухни, ванны, умывальника, душа, поэтому можно без труда оформить ванную комнату в единой стилистике.  Создать индивидуальный стиль в ванной комнате помогут также аксессуары Frap.

Кроме смесителей и аксессуаров для ванной комнаты, Frap также производит высококачественные кухонные мойки из нержавеющей стали, которые характеризуются достойным качеством при низкой стоимости.

Преимущества продукции Frap

• Итальянские технологии литья – делают внутреннюю и внешнюю поверхность смесителя идеально гладкой и улучшают антикоррозийные свойства смесителей Frap

• Разнообразие вариантов конструкции и дизайна – позволяют купить смеситель в любом стиле по разумной цене

• Наличие таймера автоотключения, регуляторов температуры и наполнения в современных сенсорных смесителях – совмещение функций сенсорного и термостатического смесителя

• Простота монтажа – смесители Frap легко установить даже непрофессионалу

• Гарантия 1 год на картридж

• Демократичная стоимость

Frap производитель недорогих качественных смесителей для раковин

Frap: Фрап

Страна производитель: Китай

Компания Haiba (Хайба) крупнейшей производитель сантехнического оборудования, имеет собственную сеть по всему Миру. Торговая марка Frap (Фрап) предлагаемая компанией Haiba, соответствует следующим мировым стандартам:

CE (Conformite Europeenne) – знак европейского соответствия, дается изделиям соответствующим директивам и стандартам Европейского Союза предъявляемым к продуктам.

UL (Underwriters Laboratories) – лаборатория по сертификации и стандартизации в области технической безопасности США.

ISO (ИСО) International (Международная) Organization (организация) for Standardization (по стандартизации) – занимается выдачей стандартов. Так же продукция Frap (Фрап) имеет все необходимые российские сертификаты, зарегистрированный торговый знак.

Смесители Frap выполнены в современном дизайне, включают в себя последние технические разработки, имеют высокое качество. Frap, предлагает широкую линейку своей продукции, это смесители эконом класса, смесители серии Люкс, аксессуары для ванной, смесители для кухни и для раковин, смесители для ванны, одним словом любой покупатель сможет подобрать для себя необходимую модель, согласно его техническим назначениям и финансовым возможностям.

Качество начинается с сырья

Для производства серии Люкс смесителей Frap, используется медное сырье, европейского качества, оно экологически безопасно для здоровья и не имеет токсичных веществ. Сырье отличается высокими показателями прочности и пластичности, что не позволяет изделиям, изготовленным из него трескаться, деформироваться, что в свою очередь может привести к протечкам. Высокое качество используемых материалов в производстве смесителей, дает гарантию долгой службы продукта.

Технологии Frap

При отливки продукции используется итальянская технология IMR. В смесители устанавливаются сердечники, делающие поверхность продукта гладкой, блестящей и чистой, так же на поверхности обработанной таким образом практически не нарастают известковые отложения. Благодаря тому, что изделия обрабатываются на японских станках CNC, оборудование Brother, отклонения в размерных показаниях не превышают 0,05 мм.

Автоматизированное гальваническое нанесение, делает покрытие изделия гладким, идеально ровным и чистым. Изделия не выцветут в течение многих – многих лет. Продукция Frap (Фрап) успешно прошла 200 часовые испытания на прочность в солевом тумане. В аэраторах стоит система насыщения воды кислородом, что снижает затраты воды и делает его менее шумным. Аэратор легко подвергается самостоятельной очистки. В смесителях установлены испанские керамические картриджи, производства Sedal. Все серии проходят испытания на разрыв давлением 2,5 МРА, в свою очередь картриджи тестируются на герметичность. Продукция комплектуется душевыми шлангами, производства Youshi (Xiamen).

смесители frap: отзывы сантехников, модели, фото

Сантехника Frap относительно недавно вошла на отечественный рынок – в 2002 г. Китайский производитель заявил о продаже качественных аналогов моделей ведущих мировых брендов смесителей. За это время продукция успела собрать много как положительных, так и отрицательных отзывов у потребителей и сантехников. Вместе с фото эти мнения помогут вам разобраться в модельном ряду производителя.

Что представляют собой компания Frap и ее смесители

Эта продукция относится к бюджетной категории. Самые дорогие люкс-модели в линейке компании соизмеримы по стоимости со средними смесителями европейских производителей. Сантехника китайская, но фабричная. Поэтому менеджеры в специализированном магазине скажут вам, что она гораздо надежнее, чем китайские товары кустарного производства. Помимо смесителей компания изготавливает раковины и мойки, фитинги и трубы, мебель и аксессуары для ванной, зеркала и даже фены. Производитель также выпускает сантехнику под торговыми марками-сателлитами Ledeme и Gappo.

Продукция Frap сертифицирована во многих странах, в том числе и в Российской Федерации. Имеет сертификаты гигиены, качества и др. Производитель обеспечивает сервисную поддержку, обслуживание и ремонт в течение гарантийного срока. Судя по текстовым отзывам на одной из ведущих мировых торговых интернет-площадок AliExpress, продукцию Frap покупают и в США, и в Европе. Подавляющее большинство людей, заказавших смесители этого бренда, живут в России.

Рычажный смеситель

По большей части компания делает смесители, похожие на модели известных брендов. Оригинальных приборов в линейке компании немного. Потребители утверждают, что изделия привлекают современным внешним видом и возможностью подобрать модель под стиль комнаты. Ключевое же качество смесителей Frap, на котором делают акцент маркетологи компании, — экономичность. Она заключается в:

1. Европейских стандартах экономии воды.
2. Сбережения ваших денег. Продукция похожа по своим качествам на дорогую, но стоит дешевле.

Внимание! Низкая стоимость чаще всего означает использование менее качественных материалов и технологии. Frap объясняет её главным образом оптимизированным процессом производства, а также говорит о низкой себестоимости сырья. Например, вместо нержавеющей стали основная линейка смесителей изготавливается из латуни и бюджетных сплавов.

Ассортимент смесителей Frap

Компания производит смесители для разных нужд. Наиболее популярна в модельном ряду продукция категории люкс. Характерная особенность её конструкции – высокий «носик», что сделано для удобства и внешнего эстетизма. Люкс-модели делают из латуни с помощью гальванизации, а затем покрывают хромом. Это позволяет предложить покупателю разные цвета товара, чтобы соответствовать дизайну конкретной комнаты:

• черный;
• белый;
• матовый;
• песочный;
• полированный.

Совет. Среди потребителей наибольшей популярностью пользуются одно- и двухрычажные смесители. Специалисты также рекомендуют их как самые простые.

Люксовая серия Frap носит имя Gappo или просто Frap G. Модели, в неё входящие, сделаны по лицензии мирового лидера в производстве сантехники – немецкой компании Grohe. Фактически, это те смесители, которые немцы сняли с производства как слегка устаревшие в дизайне. Именно бренд Gappo среди всей линейки смесителей и другой продукции компании Frap рекомендуют сантехники.

Комплектация смесителя

Эконом-класс смесителей Frap обычно изготавливают из бюджетного металлического сплава – силумина. Однако по отзывам потребителей, очень часто корпус модели лопается после недолгого времени работы. Специалисты рекомендуют с осторожностью относиться к покупке самых дешевых смесителей: никто не застрахует вас от поломки через 1,5 мес., хотя кран может проработать и несколько лет. Лучше такие смесители подойдут для загородных домов, дач и других мест с несильным напором воды.

Совет. Чтобы поменять смеситель по гарантии, устанавливайте его аккуратно. Гайки закручивайте без использования гаечного ключа. В процессе эксплуатации во время гарантийного срока пользуйтесь краном бережно.

Отзывы и советы потребителей и сантехников

Отзывов о смесителях Frap довольно много. Люди высказываются как положительно, так и резко негативно. По мнению сантехников, факторы долговечной и приятной для вас работы крана заключаются в следующем:

1. Внимательно проверяйте товар на месте, если покупаете лично, а не в интернет-магазине. Потребители нередко встречают мелкий брак. Продавцы меняют такие изделия, но на это вам придётся потратить время и нервы.
2. Тяжелый и мощный смеситель будет служить дольше, чем лёгкий и тонкостенный.
3. Лучше не выбирать модели с сенсорным управлением. Эта технология в бюджетных моделях довольно ненадежная, может работать некорректно и доставить вам лишние хлопоты. По той же причине лучше избегать функции автоматической экономии воды: уменьшения или перекрытия струи после определенного времени в режиме сильного напора.
4. Лучше покупать классическую, а не дизайнерскую модель. В последних много непродуманных деталей:

Отзывы говорят о том, что качество таких смесителей не очень высокое

• из силуминовых креплений выскакивают тяжёлые шарики из хрусталя;
• облезают декоративные дельфины или другие фигурки, золотистое напыление.

Продукция Frap часто подделывают. Чтобы обезопасить себя, в первую очередь проверьте наличие сертификатов у продукции. Можно проверить смеситель и вручную, при помощи магнита. Если «барашки» не магнитятся – товар однозначно поддельный.

Сантехника Frap: видео

FRAP – Santorg

ПОЛЬЗОВАТЕЛЬСКОЕ СОГЛАШЕНИЕ

Настоящее Соглашение заключается между ООО «Компания Аква-Стиль» (далее –Владелец) и любым лицом, становящимся после принятия условий данного соглашения пользователем веб-сайта, расположенного в сети Интернет по адресу: https://santorg.com (далее – Сайт), являющегося сервисом, предоставляющим доступ к информации о товарах, предназначенной для потенциальных Покупателей (потребителей) – интернет-магазином, в дальнейшем именуемым «Пользователь», вместе по тексту Соглашения именуемые «Стороны», а по отдельности – «Сторона». В соответствии со статьей 435 Гражданского кодекса РФ настоящее Пользовательское соглашение признается офертой.

1. Термины и определения, используемые в Соглашении

В Соглашении, если из текста Соглашения прямо не вытекает иное, следующие слова и выражения будут иметь указанные ниже значения:
1.1. Сайт – совокупность программных и аппаратных средств для ЭВМ, обеспечивающих публикацию для всеобщего обозрения информации и данных, объединенных общим
целевым назначением, посредством технических средств, применяемых для связи между
ЭВМ в сети Интернет. Сайт находится в сети Интернет по адресу: https://santorg.com/.
1.2. Администратор/Владелец Сайта – ООО «Компания Аква-Стиль», расположенное по
адресу: Самарская обл., город Тольятти, улица Дзержинского, дом 56, комната 93.
1.3. Контентом Сайта признаются все объекты, размещенные на Сайте, в том числе
элементы дизайна, текст, графические изображения, иллюстрации, видео, скрипты,
программы, музыка, звуки и другие объекты и их подборки. Владелец Сайта является
обладателем исключительных прав на использование Сайта, включая весь контент Сайта.
1.4. Пользователь – пользователь сети Интернет, в частности Сайта, имеющий свою
личную страницу (профиль/аккаунт).
1.5. Профиль/аккаунт (Профиль) – личная страница Пользователя на Сайте, доступная
всем Пользователям Сайта.
1.6. Учетная информация – уникальное имя Пользователя (логин) и пароль для входа на
Сайт, указываемые Пользователем при регистрации на Сайте.
1.7. Модерация – просмотр Владельцем Сайта размещаемой (или планируемой к
размещению – Премодерация) на Сайте Пользователем информации на предмет ее
соответствия положениям настоящего Соглашения.

2. Предмет Соглашения

2.1. Владелец Сайта оказывает Пользователю услуги по предоставлению доступа к
сервисам Сайта, при этом обязательным условием оказания Владельцем Сайта услуг в
соответствии с настоящим Соглашением является принятие, соблюдение Пользователем и
применение к отношениям Сторон требований и положений, определенных настоящим
Соглашением.
2.2. Владелец Сайта оставляет за собой право изменять условия настоящего Соглашения и
всех его неотъемлемых частей без согласования с Пользователем с уведомлением
последнего посредством размещения на Сайте новой редакции Соглашения или какой-
либо его неотъемлемой части, подвергшейся изменениям. Принимая во внимание, что
информационная рассылка может быть признана Сторонами спамом, Пользователь
обязуется не менее одного раза в месяц знакомиться с содержанием Соглашения,
размещенного на Сайте, в целях своевременного ознакомления с его изменениями. Новая
редакция Соглашения и/или какой-либо его неотъемлемой части вступает в силу с
момента опубликования на Сайте, если иной срок вступления изменений в силу не
определен Владельцем Сайта при их опубликовании. Действующая редакция Соглашения
и всех приложений к нему всегда находится на Сайте в публичном доступе по адресу:
https://santorg.com/.

3. Права и обязанности Владельца Сайта

3.1. Владелец Сайта обязуется:
3.1.1. Оказывать Пользователю услуги, указанные в пункте 2.1 настоящего Соглашения.
Доступ к Сайту предоставляется путем присвоения Пользователю Учетной информации в
течение 1 (одного) рабочего дня с даты регистрации последнего по адресу https://santorg.com/.
3.1.2. Предоставлять Пользователю возможность самостоятельно публиковать
информацию о самом себе.
3.1.3. Не разглашать третьим лицам Учетную информацию Пользователя.
3.1.4. Обеспечивать круглосуточную доступность сервера, на котором расположен Сайт,
за исключением времени проведения профилактических работ.
3.2. Владелец Сайта имеет право:
3.2.1. В случае нарушения Пользователем условий Соглашения направить Пользователю
предупреждение, содержащее перечень нарушений. В случае если Пользователь не
устранит нарушения в течение одного дня с момента направления ему уведомления или
повторно нарушит указанные условия или иные условия, Владелец Сайта имеет право в
одностороннем порядке отказаться от исполнения Соглашения, заблокировать доступ
Пользователей к Профилю Пользователя и аннулировать Профиль Пользователя.
3.2.2. Осуществлять Модерацию в случаях, когда информация, размещаемая
Пользователем, пропагандирует ненависть и/или дискриминацию людей по расовому,
этническому, половому, религиозному, социальному признакам; пропагандирует
употребление наркотических и прочих средств, наносящих вред здоровью; призывает к
бесчеловечному обращению с животными; нарушает права национальных и иных
меньшинств; содержит призывы к насильственным действиям; нарушает права авторов и
иных владельцев интеллектуальных прав.
3.2.3. Распоряжаться статистической информацией, связанной с функционированием
Сайта, а также информацией Пользователей для обеспечения адресного показа рекламной
информации различным аудиториям Пользователей Сайта.
3.2.4. Направлять Пользователю информацию о развитии Сайта и его сервисов;
отправлять sms-сообщения с целью информирования о кодах активации, проведения
опросов о качестве работы Сайта, предоставления и запросов прочей информации, а также
рекламировать собственную деятельность и услуги.

4. Права и обязанности Пользователя

4.1. Пользователь обязуется:
4.1.1. Полностью ознакомиться с условиями настоящего Соглашения до момента
регистрации на Сайте.
4.1.2. Соблюдать все условия настоящего Соглашения.
4.1.3. Не передавать сведения о других Пользователях, полученные посредством Сайта,
третьим лицам.
4.1.4. Не передавать свою Учетную информацию третьим лицам.
4.1.5. Не размещать на Сайте персональные данные других лиц, а также не использовать
персональные данные других Пользователей или Пользователей каким-либо образом, не
соответствующим требованиям законодательства РФ, в противоправных или
противозаконных целях, в целях извлечения выгоды и любых иных целях, не
соответствующих целям создания Сайта.
4.1.6. Не размещать в Профиле информацию и объекты (включая ссылки на них), которые
могут нарушать права и интересы других лиц.
4.1.7. Не регистрироваться в качестве Пользователя от имени или вместо другого лица или
регистрировать группу (объединение) лиц или юридическое лицо/индивидуального
предпринимателя в качестве Пользователя.
4.1.8. Не загружать, не хранить, не публиковать, не распространять любую информацию,
которая:
– содержит угрозы, дискредитирует, оскорбляет, порочит честь и достоинство или
деловую репутацию или нарушает неприкосновенность частной жизни других
Пользователей или третьих лиц;
– нарушает права несовершеннолетних лиц;
– является вульгарной или непристойной, содержит нецензурную лексику, содержит
порнографические изображения и тексты или сцены сексуального характера с участием
несовершеннолетних;
– содержит сцены насилия либо бесчеловечного обращения с животными;
– содержит описание средств и способов суицида, любое подстрекательство к его
совершению;
– пропагандирует и/или способствует разжиганию расовой, религиозной, этнической
ненависти или вражды, пропагандирует фашизм или идеологию расового превосходства;
– содержит экстремистские материалы;
– пропагандирует преступную деятельность или содержит советы, инструкции или
руководства по совершению преступных действий;
– содержит информацию ограниченного доступа, включая, но не ограничиваясь,
государственную и коммерческую тайну, информацию о частной жизни третьих лиц;
– содержит рекламу или описывает привлекательность употребления алкоголя и/или
наркотических веществ, в том числе «цифровых наркотиков» (звуковых файлов,
оказывающих воздействие на мозг человека за счет бинауральных ритмов), информацию о
распространении наркотиков, рецепты их изготовления и советы по употреблению;
– носит мошеннический характер;
– а также нарушает иные права и интересы граждан и юридических лиц или требования
законодательства РФ.
4.1.9. Не использовать программное обеспечение и не осуществлять действия,
направленные на нарушение нормального функционирования Сайта и его сервисов или
персональных страниц Пользователей, не загружать, не хранить, не публиковать, не
распространять и не предоставлять доступ или иным образом использовать вирусы,
трояны и другие вредоносные программы; не использовать без специального на то
разрешения Владельца Сайта автоматизированные скрипты (программы) для сбора
информации на Сайте и (или) взаимодействия с Сайтом и его сервисами.
4.1.10. Не пытаться получить доступ к логину и паролю другого Пользователя, в том
числе включая, но не ограничиваясь, обман, взлом Профилей других Пользователей и
прочее.
4.2. Пользователю запрещено:
4.2.1. Осуществлять незаконные сбор и обработку персональных данных других
Пользователей.
4.2.2. Осуществлять доступ к каким-либо услугам иным способом, кроме как через
интерфейс, предоставленный Владельцем Сайта, за исключением случаев, когда такие
действия были прямо разрешены Пользователю в соответствии с отдельным соглашением
с Владельцем Сайта.
4.2.3. Воспроизводить, дублировать, копировать, продавать, осуществлять торговые
операции и перепродавать услуги для каких-либо целей, за исключением случаев, когда
такие действия были прямо разрешены Пользователю в соответствии с условиями
отдельного соглашения с Владельцем Сайта.
4.2.4. Размещать коммерческую и политическую рекламу вне специальных разделов
Сайта, установленных Владельцем Сайта.
4.2.5. Размещать любую информацию, которая, по мнению Владельца Сайта, является
нежелательной, ущемляет интересы Пользователей или по другим причинам является
нежелательной для размещения на Сайте.
4.3. Пользователь имеет право:
4. 3.1. Круглосуточно получать доступ к серверу, на котором расположен Сайт, за
исключением времени проведения профилактических работ.
4.3.2. Самостоятельно изменять пароль, не уведомляя об этом Владельца Сайта.
4.3.3. Самостоятельно редактировать ранее размещенную о себе информацию на Сайте.
4.3.4. Обратиться в службу поддержки для блокирования своего Профиля (при отсутствии
действующих демодоступов и подписок).
4.4. Пользователь согласен с тем, что, осуществляя доступ к Сайту и пользуясь его
контентом, он:

4.4.1. Выражает свое безоговорочное согласие со всеми условиями настоящего
Соглашения и обязуется их соблюдать или прекратить использование Сайта.
4.4.2. Получает личное неисключительное и непередаваемое право использовать контент
Сайта на одном компьютере при условии, что ни сам Пользователь, ни любые иные лица
при содействии Пользователя не будут копировать или изменять программное
обеспечение; создавать программы, производные от программного обеспечения;
проникать в программное обеспечение с целью получения кодов программ; осуществлять
продажу, уступку, сдачу в аренду, передачу третьим лицам в любой иной форме прав в
отношении программного обеспечения сервисов, предоставляемых Сайтом.
4.4.3. В целях реализации настоящего Соглашения Пользователи дают Владельцу Сайта
разрешение на использование, хранение, обработку и распространение персональных
данных тем способом и в той мере, в которой это необходимо для исполнения условий
настоящего Соглашения. Порядок использования, хранения, обработки и распространения
персональных данных Пользователей размещен на Сайте по адресу:https://santorg.com/. Пользователь соглашается на передачу третьим
лицам персональных и иных данных, в том числе для целей их обработки, для
обеспечения функционирования Сайта, реализации партнерских и иных программ, при
условии обеспечения в отношении передаваемых данных режима, аналогичного режиму,
существующему на Сайте, в том числе включая, но не ограничиваясь, передачу
персональных данных лицам, аффилированным с ООО «Компания Аква-Стиль» или
заключившим с ними договоры, а также третьим лицам в случаях, когда такая передача
необходима для использования Пользователем определенного сервиса либо для
исполнения определенного соглашения или договора с Пользователем. Обработка
персональных данных осуществляется в соответствии с политикой по обработке
персональных данных ООО «Компания Аква-Стиль».

5. Регистрация Пользователя

5.1. В целях пользования услугами, предоставляемыми Владельцем Сайта по настоящему
Соглашению, Пользователь может пройти процедуру регистрации на
Сайте по адресу https://santorg.com/. Регистрация Пользователя на Сайте является
бесплатной, добровольной.
5.2. При регистрации на Сайте Пользователь обязан предоставить Владельцу Сайта
необходимую достоверную и актуальную информацию для формирования Профиля,
включая уникальные для каждого Пользователя логин (адрес электронной почты) и
пароль доступа к Сайту. Регистрационная форма Сайта может запрашивать у
Пользователя дополнительную информацию.
5.3. После предоставления информации, указанной в пункте 5. 2 настоящего Соглашения,
Пользователю необходимо подтвердить регистрацию путем выражения своего желания
через нажатие на ссылку подтверждения регистрации в сообщении, отправленном на
указанную им электронную почту.
5.4. По завершении процесса регистрации Пользователь становится обладателем Учетной
информации Пользователя, что означает, что он несет ответственность за безопасность
Учетной информации, а также за все, что будет сделано на Сайте под Учетной
информацией Пользователя. Пользователь обязан немедленно уведомить Владельца Сайта
о любом случае несанкционированного доступа к Сайту, то есть осуществленного третьим
лицом без согласия и ведома Пользователя и/или о любом нарушении безопасности
Учетной информации Пользователя. Владелец Сайта не несет ответственности за
возможную потерю или порчу данных, которая может произойти из-за нарушения
Пользователем положений настоящего пункта Соглашения.
5. 5. Для начала работы с Сайтом Пользователь должен ввести в соответствующем разделе
Сайта свою Учетную информацию.
5.6. Если Пользователем не доказано обратное, любые действия, совершенные с
использованием его логина и пароля, считаются совершенными соответствующим
Пользователем. В случае несанкционированного доступа к логину и паролю и/или
Профилю Пользователя или распространения логина и пароля Пользователь обязан
незамедлительно сообщить об этом Владельцу Сайта в установленном порядке.

6. Ответственность Сторон

6.1. Пользователь самостоятельно определяет перечень организационных и программных
(для ЭВМ) средств для сохранения в тайне своей Учетной информации и обеспечения
санкционированного доступа к ней. Владелец Сайта не несет ответственность за убытки,
причиненные Пользователю в результате разглашения третьим лицам Учетной
информации Пользователя, произошедшего не по вине Владельца Сайта. Если любое
лицо, помимо Пользователя, авторизуется на Сайте, используя Учетную информацию
Пользователя, то все действия, совершенные таким лицом, будут считаться
совершенными этим Пользователем. Пользователь самостоятельно несет ответственность
за все действия, совершенные им на Сайте, а также за все действия, совершенные на Сайте
любыми иными лицами с использованием Учетной информации Пользователя.
6.2. Владелец Сайта не гарантирует, что программное обеспечение Сайта не содержит
ошибок и/или компьютерных вирусов или посторонних фрагментов кода. Владелец Сайта
предоставляет возможность Пользователю пользоваться программным обеспечением
Сайта «как оно есть», без каких-либо гарантий со стороны Владельца Сайта.
6.3. Владелец Сайта не несет ответственности за убытки, причиненные Пользователю в
результате сообщения другим Пользователем недостоверной информации, а также
причиненные действиями (бездействием) другого Пользователя. Владелец Сайта не
гарантирует, что информация, содержащаяся в Профилях Пользователей, является
достоверной и полной.
6.4. Владелец Сайта прилагает все возможные усилия для обеспечения нормальной
работоспособности Сайта, однако не несет ответственности за неисполнение или
ненадлежащее исполнение обязательств по Соглашению, а также возможные убытки,
возникшие в том числе, но не ограничиваясь, в результате:
– неправомерных действий Пользователей, направленных на нарушения информационной
безопасности или нормального функционирования Сайта;
– сбоев в работе Сайта, вызванных ошибками в коде, компьютерными вирусами и иными
посторонними фрагментами кода в программном обеспечении Сайта;
– отсутствия (невозможности установления, прекращения и пр.) интернет-соединений
между сервером Пользователя и сервером Сайта;
– проведения государственными и муниципальными органами, а также иными
организациями мероприятий в рамках Системы оперативно-разыскных мероприятий;
– установления государственного регулирования (или регулирования иными
организациями) хозяйственной деятельности коммерческих организаций в сети Интернет
и/или установления указанными субъектами разовых ограничений, затрудняющих или
делающих невозможным исполнение Соглашения;
– других случаев, связанных с действиями (бездействием) Пользователей и/или других
субъектов, направленными на ухудшение общей ситуации с использованием сети
Интернет и/или компьютерного оборудования, существовавшей на момент заключения
Соглашения, а также любых других действий, направленных на Сайт и на третьих лиц;
– выполнения работ, указанных в пунктах 6. 5 и 6.6 настоящего Соглашения.
6.5. Владелец Сайта имеет право производить профилактические работы в программно-
аппаратном комплексе Сайта с временным приостановлением работы Сайта по
возможности в ночное время и максимально сокращая время неработоспособности Сайта,
уведомляя об этом Пользователя, если технически это представляется возможным.
6.6. В случае наступления форс-мажорных обстоятельств, а также аварий или сбоев в
программно-аппаратных комплексах третьих лиц, сотрудничающих с Владельцем Сайта,
или действий (бездействия) третьих лиц, направленных на приостановку или прекращение
функционирования Сайта, возможна приостановка работы Сайта без предварительного
уведомления Пользователя.
6.7. Владелец Сайта не несет ответственности за нарушение Пользователем настоящих
Правил и оставляет за собой право по своему собственному усмотрению, а также при
получении информации от других пользователей либо третьих лиц о нарушении
Пользователем настоящих Правил изменять (модерировать) или удалять любую
публикуемую Пользователем информацию, нарушающую запреты, установленные
настоящими Правилами (включая личные сообщения), приостанавливать, ограничивать
или прекращать доступ Пользователя ко всем или к любому из разделов или сервисов
Сайта в любое время по любой причине или без объяснения причин, с предварительным
уведомлением или без такового, не отвечая за любой вред, который может быть причинен
таким действием. Владелец Сайта закрепляет за собой право удалить Профиль
Пользователя и (или) приостановить, ограничить или прекратить доступ Пользователя к
любому из сервисов Сайта, если обнаружит, что, по его мнению, Пользователь
представляет угрозу для Сайта и (или) его Пользователей. Владелец Сайта не несет
ответственности за осуществленное в соответствии с настоящими Правилами временное
блокирование или удаление информации либо удаление персональной страницы
(прекращение регистрации) Пользователя. Удаление Профиля Пользователя означает
автоматическое удаление всей информации, размещенной на ней, а также всей
информации Пользователя, введенной при регистрации на Сайте. После удаления
персональной страницы Пользователь теряет права доступа к Сайту.
6.8. Ни одна из Сторон не несет ответственности за полное или частичное неисполнение
любой из своих обязанностей, если неисполнение является следствием таких
обстоятельств, как наводнение, пожар, землетрясение, другие стихийные бедствия, война
или военные действия и другие обстоятельства непреодолимой силы, возникшие после
заключения Соглашения и не зависящие от воли Сторон.

7. Порядок разрешения споров и урегулирования претензий

7.1. В случае возникновения споров между Пользователем и Владельцем Сайта по
вопросам, связанным с исполнением Соглашения, Стороны примут все меры к
разрешению их путем переговоров между собой. Претензионный порядок разрешения
споров обязателен. Претензии Пользователей по предоставляемым Услугам принимаются
и рассматриваются Владельцем Сайта только в письменном виде и в порядке,
предусмотренном настоящим Соглашением и действующим законодательством РФ.
7.2. Для разрешения споров, возникших между Пользователем и Владельцем Сайта в
результате использования услуг, применяется следующий претензионный порядок.
Пользователь, считающий, что его права нарушены из-за действий Владельца Сайта,
направляет последнему претензию, содержащую суть предъявляемого требования,
обоснование его предъявления, а также все данные Пользователя. Претензия также
направляется Владельцу Сайта в письменном виде посредством отправки по почте или
на сайте https://santorg.com/;
– в течение 5 (пяти) рабочих дней со дня получения претензии Владелец Сайта обязан
изложить свою позицию по указанным в ней принципиальным вопросам и направить свой
ответ по адресу электронной почты или почтовому адресу, указанному в претензии
Пользователя;
– в случае недостижения разрешения спора путем претензионного порядка спор подлежит
рассмотрению в соответствии с пунктом 7.4 Соглашения;
– Владельцем Сайта не рассматриваются анонимные претензии или претензии, не
позволяющие идентифицировать Пользователя на основе предоставленных им при
регистрации данных, или претензии, не содержащие данных, указанных в настоящем
пункте настоящего Соглашения.
7.3. Для решения технических вопросов при определении вины Пользователя в результате
его неправомерных действий при пользовании сетью Интернет и Сайтом, в частности,
Владелец Сайта вправе самостоятельно привлекать компетентные организации в качестве
экспертов. В случае установления вины Пользователя последний обязан возместить
затраты на проведение экспертизы.
7.4. При недостижении согласия между Сторонами путем переговоров спор, вытекающий
из настоящего Соглашения, подлежит рассмотрению в суде общей юрисдикции по месту
нахождения Владельца Сайта.

8. Прочие условия

8.1. Настоящее Соглашение вступает в силу с момента акцепта настоящей оферты
Пользователем и заключается на неопределенный срок.
8.2. Настоящее Соглашение является офертой и в силу действующего гражданского
законодательства РФ Владелец Сайта имеет право на отзыв оферты в соответствии со
статьей 436 Гражданского кодекса РФ. В случае отзыва настоящего соглашения
Владельцем Сайта настоящее соглашение считается прекращенным с момента отзыва.
Отзыв осуществляется путем размещения соответствующей информации на Сайте.
8.3. Положения настоящего Соглашения устанавливаются, изменяются и отменяются
Владельцем Сайта в одностороннем порядке без предварительного уведомления. С
момента размещения на Сайте новой редакции Соглашения предыдущая редакция
считается утратившей свою силу. В случае существенного изменения положений
настоящего Соглашения Владелец Сайта извещает об этом Пользователей путем
размещения на Сайте соответствующего сообщения.
8.4. Если Пользователь не согласен с условиями настоящего Соглашения, то он должен
немедленно удалить свой Профиль с Сайта, в противном случае продолжение
использования Пользователем Сайта означает, что Пользователь согласен с условиями
Соглашения.
8.5. Вопросы, не урегулированные настоящим Соглашением, подлежат разрешению в
соответствии с законодательством РФ.

Смесители Frap, Lemark и Rossinka: все о производителях

18.01.2019

Наверняка вы хотите знать, что покупаете. Особенно это актуально, если речь идет о недешевых товарах, рассчитанных на долгосрочное использование. Именно к этой категории относится сантехническое оборудование, в том числе и смесители.

Данная статья представляет собой краткий рассказ о самых популярных производителях смесителей, представленных в сети «Мастер Сантехник» и, естественно, в нашем интернет-магазине. Также здесь можно купить насос для воды в Челябинске по максимально выгодной цене!

Чехия, Россия и Китай

Для начала, скажем, что фабричное производство в большинстве случаев является гарантом качества. И дело не только в современном промышленном оборудовании, но и в системе контроля. Хотите быть уверены в качестве товара? Обратите внимание на наличие сертификата по системе  ISO 9001.

• LEMARK. Компания находится в Чехии и производит весь спектр смесителей для ванной комнаты и кухни. Помимо современного дизайна, необходимо отметить, что комплектация изделий разрабатывается совместно с Россией. В связи с достаточно сложными условиями эксплуатации (старые трубы и жесткая вода) к смесителям предъявляются строгие технические требования. Также следует обратить внимание на тщательность контроля: перед поставкой в магазин смесители тестируют путем подачи воды под давлением 9 Атм. Таким образом проверяют не только исправность всех элементов конструкции, но и ее герметичность.
• Frap. Смесители изготавливаются в Китае, однако это не говорит о низком качестве или чем-то еще. Отзывы,  а также лидирующие позиции на рынке говорят об обратном: фабричный Китай – это хорошо. Каждая торговая марка имеет свои преимущества. Если мы говорим о Frap, это, прежде всего, демократичные цены, большой ассортиментный ряд и достойное качество. Статистика показывает, что именно эти смесители стоят в доме у каждого второго россиянина.
• Rossinka. Разработаны НИИ Сантехники и выпускаются в России, что позволяет говорить о полном соответствии техническим требованиям. На официальном сайте производитель говорит о 7 годах гарантийного обслуживания, наличии сертификата ISO 9001 и многоступенчатой проверке качества. Корпус изделий изготавливается методом сплошного литья из латуни с максимально низким содержанием свинца, что делает продукт еще и безопасным.  Изделия отличаются прочностью и современным дизайном.

На нашем сайте вы можете не только ознакомиться с ассортиментом смесителей названных выше производителей, но и оформить заказ.

Подробная консультация для каждого из вас

Если вы не уверены в собственном выборе и растерялись в магазине – отчаиваться не стоит. Грамотные и, что немаловажно, опытные консультанты всегда придут на помощь. Информация о наличии интересующего товара в конкретных магазинах представлена на сайте и постоянно обновляется. Также у нас можно купить насосы бытовые в Челябинске, раковины, унитазы и смесители, то есть весь спектр сантехнического оборудования по демократичной цене.

FRAP, ООО. Информация о компании. Адреса, контакты, отзывы, фото

Поставщик водоснабжения и сантехники. Склад находится в Московской области. Лучшее качество с лучшей ценой, поставляет ППР фитинги, ППР трубы, шаровые краны, м/п фитинги, резьбовые фитинги, хомуты и инструменты для водоснабжения и сантехники.

Структура рейтинга

Отлично
Хорошо
Неплохо
Плохо
Ужасно

Отзывы и рейтинг компании FRAP

Фотоальбом FRAP

Видеогалерея FRAP

FRAP в новостях СОК

FRAP в журнале СОК

Документы, добавленные компанией

Структура рейтинга

Отлично
Хорошо
Неплохо
Плохо
Ужасно

Отзывы и рейтинг компании FRAP

• Отзывов пока нет

Восстановление флуоресценции после фотообесцвечивания (FRAP)

Введение

Флуоресцентные маркеры возбуждаются светом определенной длины волны, а затем излучают свет с другой длиной волны. Это делает их очень ценными для научных исследований, позволяющих находить клетки / белки и даже отслеживать их во времени. Однако, если для возбуждения флуорофоров используется очень интенсивный свет или они подвергаются слишком долгому воздействию, флуоресцентные молекулы теряют способность излучать свет и обозначаются как , обесцвеченный или , фотообесцвеченный .Отбеленные флуорофоры навсегда теряют способность к флуоресценции, это необратимое фотохимическое изменение. Это большая проблема при визуализации: если флуорофоры обесцвечиваются, они больше не могут действовать как маркеры, и визуализация невозможна. Однако некоторые методы используют отбеливание, основным из которых является «восстановление флуоресценции после фотообесцвечивания» или FRAP .

Принцип FRAP

FRAP — это метод, разработанный Axelrod et al. (1976) как метод изучения подвижности белков в живых клетках. В FRAP определенная область клетки или ткани фотообесцвечивается интенсивным лазерным светом, удаляя флуоресценцию из этой области. Эта область обычно является клеточной мембраной или областью, где происходит диффузия, например ядром, поскольку FRAP требует, чтобы флуоресцентные молекулы свободно перемещались, чтобы функционировать. Флуоресценция в обесцвеченной области будет медленно восстанавливать по мере удаления обесцвеченных флуорофоров и движения здоровых флуорофоров из других областей, отсюда и название восстановления флуоресценции после фотообесцвечивания.Этот процесс можно увидеть на Рис.1 .

Рисунок 1: Принцип FRAP на бислое клеточной мембраны, с обобщенным видом сверху и молекулярным видом сбоку. 1) Мембрана помечена флуоресцентной молекулой (красный). 2) Сфокусированный лазер (зеленый) обесцвечивает выбранную область мембраны (черный). 3) Диффузия флуоресцентных молекул приводит к восстановлению флуоресценции с течением времени. D) Через некоторое время флуоресценция полностью восстанавливается, но с более низкой общей интенсивностью, чем раньше. Изображение с Wikimedia Commons, диаграмма Frap.

Скорость восстановления флуоресценции обесцвеченной области прямо пропорциональна скорости диффузии флуоресцентных или меченых молекул, что дает информацию о подвижности меченых молекул (Ishikawa-Ankerhold et al. 2012). Обесцвечивая компонент или органеллу внутри клетки (например, ядро), вы затем можете наблюдать скорость диффузии молекул в этот компонент и из него по мере восстановления флуоресценции.

Приложения FRAP

FRAP был первоначально разработан как метод изучения подвижности белков в живых клетках и с тех пор превратился в популярный метод исследования событий молекулярного транспорта, таких как диффузия, динамика белков или взаимодействия между клеточными компонентами.FRAP по-прежнему используется для исследований подвижности белков и молекулярной диффузии, но также в него были включены такие приложения, как динамика связывания (Groeneweg et al. 2014), а также использование в сочетании с отслеживанием одиночных молекул (Tran-Ba et al. al. 2015). Пример FRAP можно увидеть на Рис.2 .

Рисунок 2: Пример работы FRAP. На изображениях показана клетка myo3, экспрессирующая GFP-миозин III. А) Перед обесцвечиванием клетки окрашиваются до однородного состояния.B) Выбирается интересующая область (ROI), в данном случае ядро. C) Мощный лазер обесцвечивает ядро, и флуорофоры в этой области больше не излучают свет. D) Флуоресценция в ROI восстанавливается за счет диффузии небеленых флуорофоров, наблюдается уменьшение общего количества флуоресценции по сравнению с A. Изображение из Ishikawa-Ankerhold et al. (2012).

FRAP был первоначально разработан с целью изучения липидных молекул в клеточной мембране, таких как их подвижность и организация.Естественно, FRAP широко используется при изучении как биологических, так и искусственных мембран, определения сайтов связывания лигандов и понимания клеточной трансдукции.

Однако другие Было выявлено использование FRAP, например, для изучения связывания с белками, включая белок-белковые взаимодействия и трафик белков. Эти исследования показать, какие лиганды могут связываться с какими белками, а также скорость связывания. Путем слияния флуоресцентных белков, таких как GFP, с интересующими белками, их механику связывания можно исследовать, а способность распространяться от одного сотовый отсек в другой.Это также пересекается с исследованиями мембран, поскольку связывание белков с мембраной также можно наблюдать с помощью FRAP.

FRAP также имеет применение за пределами мембраны в качестве мощного инструмента при изучении диффузии и связывания в определенных областях клетки. Многочисленные области могут быть обесцвечены за один эксперимент FRAP, что позволяет собирать более сложные данные о конкретных областях различных типов клеток.

Обратный FRAP (iFRAP)

В некоторых экспериментах используется инвертированная версия FRAP, которая называется iFRAP .Этот метод включает обесцвечивание всей ячейки, , за исключением интересующей области. Поскольку обесцвечивается гораздо большая площадь клетки, iFRAP является довольно трудоемким методом, но очень полезен при изучении кинетики диффузии молекул внутри неподвижной внутриклеточной структуры. iFRAP был разработан Dundr et al. (2002) и особенно полезен при изучении молекул в малых органеллах и того, как они обмениваются с окружающей цитоплазмой. Пример iFRAP можно увидеть на Рис.3 .

Рисунок 3: Эксперимент iFRAP на ячейке. A) Ячейка Cos7 перед отбеливанием, а затем полностью обесцвеченная, за исключением области интереса, показанной желтым. Эта флуоресценция быстро уменьшается по мере того, как флуорофоры диффундируют в цитоплазму. Масштаб: 10 мкм. B) Количественное изменение интенсивности флуоресценции для ROI (черный квадрат) и прилегающей области (белый квадрат) с течением времени. Изображение от Ishihama et al. (2008).

Проблемы с FRAP

Пока гибкий техники для исследования, есть некоторые потенциальные проблемы, которые следует учитывать при использовании FRAP.Во-первых, FRAP чаще всего используется на живых клетках, которые обладают способностью молекулярной диффузии, но эти живые клетки также двигаются сами по себе, заставляя сложно определить и отследить определенную рентабельность инвестиций, требующую отбеливания. В Кроме того, эти образцы являются трехмерными по своей природе, а флуорофоры выше и ниже области интереса. фокальная плоскость также обесцвечивается лазером, что означает, что обесцвеченная область более формы трехмерного конуса в отличие от двумерного круга. Форма этого отбеленного конус меняется в зависимости от числовой апертуры используемого объектива, и это необходимо учитывать, поскольку обесцвеченная зона имеет сложную форму.

Некоторые флуоресцентные белки, такие как GFP, могут переключаться между темным нефлуоресцентным состояние и флуоресцентное состояние, с эффектом мигания. GFP может проводить время в темном состоянии независимо от отбеливающего лазера, и это должно быть объясняется тем, что некоторые молекулы могут снова включиться, если они были темными, пока отбеленный. Чтобы учесть различия в FRAP, важно повторить FRAP на том же месте, что и элемент управления, но это может быть сложно, поскольку флуоресценция с каждым разом все ниже.

Камеры для FRAP

Самый Важным моментом для измерения в FRAP является интенсивность флуоресценции. Это начинается высокий, снижается почти до нуля, а затем восстанавливается до точки ниже, чем на Начало. Это означает, что необходима чувствительная камера, чтобы лучше отслеживать эти интенсивность меняется с точностью, камера с высоким отношением сигнал / шум было бы идеально, чтобы измерить эти изменения количественно.

Кроме того, поскольку отображаемые события часто являются событиями динамической диффузии в заранее определенном пространстве, подходящая камера может сузить поле зрения (FOV) до обесцвеченной области и окружающей ячейки, это также значительно повысит скорость камеры и позволит отслеживание быстрых молекулярных событий.В целом, для FRAP необходима камера sCMOS с высокой скоростью и высокой чувствительностью.

Сводка

FRAP — это универсальный биофизический метод, который широко используется для изучения динамики практически во всех аспектах клеточной биологии. Обесцвечивая часть клетки, можно изучить многие факторы, включая динамику мембран, молекулярную диффузию между клеточными компартментами и то, как разные клетки передают молекулярные сигналы между собой или внутри себя. Благодаря тщательному дизайну экспериментов и чувствительной камере для слабого освещения, FRAP представляет собой экспериментальную платформу, которая может предоставлять качественные изображения и данные, а также является важным методом флуоресценции в биофизической визуализации.

Список литературы

Axelrod D., Koppel D.E, Schlessinger J., Элсон Э. и Уэбб У.В. (1976) Мобильность измерение путем анализа кинетики восстановления флуоресцентного фотообесцвечивания. Биофизический журнал, 16 (9), 1055–1069. https://doi.org/10.1016/S0006-3495(76)85755-4

Dundr M, Hoffmann-Rohrer U, Hu Q, Grummt I, Ротблюм Л.И., Фейр Р.Д., Мистели Т. (2002) А кинетическая основа для РНК-полимеразы млекопитающих in vivo, Science, 22; 298 (5598): 1623-6

Groeneweg F.Л., ван Ройен М.Э, Фенц С., Кейзер В.И., Гевертс Б., Принс Дж., Де Клоет Э.Р., Хаутсмюллер А.Б., Шмидт Т.С. И Шааф М.Дж. (2014). Количественное определение динамика связывания ДНК глюкокортикоидного рецептора с помощью микроскопии одиночных молекул и FRAP . PloS one, 9 (3), e90532. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0090532

Исихама Ю., Тадакума Х., Тани Т. и Funatsu T (2008) Динамика пре-мРНК и поли (А) + РНК в пятнах в живых клетках, выявленных с помощью iFRAP изучает . Экспериментальные исследования клеток, 314 (4), 748–762.https://doi.org/10.1016/j.yexcr.2007.10.023

Ishikawa-Ankerhold H.C., Ankerhold R. & Drummen G.P (2012) Расширенная флуоресценция методы микроскопии — FRAP, FLIP, FLAP, FRET и FLIM . Молекулы (Базель, Швейцария), 17 (4), 4047–4132. https://doi.org/10.3390/molecules17044047

Тран-Ба, К.Х., Хиггинс Д.А., Ито Т. (2015) Восстановление флуоресценции после Измерения фотообесцвечивания и отслеживания одиночных молекул анизотропного Диффузия в идентичных областях цилиндрообразующего диблочного сополимера Фильм. Аналитическая химия, 87 (11), 5802–5809. https://doi.org/10.1021/acs.analchem.5b01041

Федеральных правил апелляционного производства | Федеральные правила апелляционного производства | Закон США

Историческая справка

Федеральные правила апелляционной процедуры были приняты постановлением Верховного суда 4 декабря 1967 г., переданы в Конгресс главным судьей 15 января 1968 г. и вступили в силу 1 июля 1968 г.

Правила были изменены 30 марта 1970 г., эфф. 1 июля 1970 г .; Мар.1, 1971, эфф. 1 июля 1971 г .; 24 апреля 1972 г., эфф. 1 октября 1972 г .; 30 апреля 1979 г., эфф. 1 августа 1979 г .; 12 октября 1984 г., Pub. L. 98–473, раздел II, §210, 98 Закон 1987 г .; 10 марта 1986 г., эфф. 1 июля 1986 г .; 18 ноября 1988 г., Pub. L. 100–690, раздел VII, §7111, 102 Stat. 4419; 25 апреля 1989 г., эфф. 1 декабря 1989 г .; 30 апреля 1991 г., эфф. 1 декабря 1991 г .; 22 апреля 1993 г., эфф. 1 декабря 1993 г ​​.; 29 апреля 1994 г., эфф. 1 декабря 1994 г .; 27 апреля 1995 г., эфф. 1 декабря 1995 г .; 23 апреля 1996 г., эфф. 1 декабря 1996 г .; 24 апреля 1996 г., Pub. L. 104–132, раздел I, §103, 110 Stat.1218; 24 апреля 1998 г., эфф. 1 декабря 1998 г .; 29 апреля 2002 г., эфф. 1 декабря 2002 г .; 27 марта 2003 г., эфф. 1 декабря 2003 г .; 25 апреля 2005 г., эфф. 1 декабря 2005 г .; 12 апреля 2006 г., эфф. 1 декабря 2006 г .; 30 апреля 2007 г., эфф. 1 декабря 2007 г .; 26 марта 2009 г., эфф. 1 декабря 2009 г .; 28 апреля 2010 г., эфф. 1 декабря 2010 г .; 26 апреля 2011 г., эфф. 1 декабря 2011 г .; 16 апреля 2013 г., эфф. 1 декабря 2013 г .; 28 апреля 2016 г., эфф. 1 декабря 2016 г .; 25 апреля 2019 г., эфф. 1 декабря 2019 г.

Дата вступления в силу и применение правил

Раздел 2 Постановления Верховного Суда от декабря 2009 г.4, 1967, при условии: «Вышеупомянутые правила вступят в силу 1 июля 1968 года и будут регулировать все разбирательства по апелляциям и петициям о пересмотре или приведении в исполнение постановлений, возбужденных после этого, и во всех таких судебных разбирательствах, находящихся на рассмотрении, за исключением той степени, в которой что, по мнению апелляционного суда, их применение в конкретном судебном разбирательстве, находящемся на рассмотрении, было бы невозможным или было бы несправедливым, и в этом случае может быть применена первая процедура ».

Дата вступления в силу поправки 1970 г .; Передача в Конгресс

Разделы 2 и 3 Постановления Верховного Суда от марта 2006 г.30 января 1970 г., предоставлено:

«2. Вышеупомянутые поправки к Федеральным правилам апелляционной процедуры вступят в силу 1 июля 1970 г. и будут регулировать все судебные разбирательства по искам, возбужденным после этого, а также все дальнейшие разбирательства по искам, находящимся на рассмотрении на тот момент, за исключением тех случаев, когда, по мнению их применение в конкретном иске, находящемся на рассмотрении, было бы невозможным или привело бы к несправедливости, и в этом случае применяется первая процедура.

«3. Верховный судья уполномочен передать Конгрессу вышеупомянутые поправки к существующим правилам в соответствии с положениями раздела 18 U.S.C., §3372, и раздел 28, U.S.C., §§2072 и 2075 ».

Комментарии Комитета к Правилам — поправка 2019 г.

26.1 Изменение названия (удалено «Корпоративное» из раздела 26.1).

Правило 15. Пересмотр или приведение в исполнение распоряжения агентства — как получено; Вмешательство | Федеральные правила апелляционного производства | Закон США

Примечания

(с изменениями, внесенными 22 апреля 1993 г., эфф. 1 декабря 1993 г ​​.; 24 апреля 1998 г., ист. 1 декабря 1998 г.; 26 марта 2009 г., эфф. 1 декабря 2009 г.)

Записки Консультативного комитета по правилам — 1967

Общее примечание .Право Верховного суда устанавливать правила практики и процедуры для судебного надзора или исполнения приказов административных органов, советов, комиссий и должностных лиц наделено 28 U.S.C. §2072 с изменениями, внесенными Законом от 6 ноября 1966 г., § 1, 80 Stat. 1323 (1 U.S. Code Cong. & Ad. News, стр. 1546 (1966)). Раздел 11 Закона о пересмотре административных распоряжений Хоббса 1950 г., 64 Stat. 1132, реконструировано как 28 U.S.C. § 2352 (28 USCA § 2352 (Дополнение 1966)), отмененный Законом от 6 ноября 1966 г., § 4, выше , предписывал апелляционным судам принимать и обнародовать при условии утверждения Судебной конференцией правила, регулирующие практика и процедура рассмотрения приказов советов, комиссий и должностных лиц, чьи приказы могут быть пересмотрены в апелляционных судах в соответствии с Законом.После этого Судебная конференция утвердила единое правило, и это правило, с небольшими изменениями, теперь действует во всех округах. Правило 18 третьего контура является типичным правилом контура, и для удобства оно упоминается как единое правило в примечаниях, сопровождающих правила под этим заголовком.

Подраздел (а) . Единообразное правило (см. Общее примечание выше) требует, чтобы ходатайство о пересмотре содержало «краткое изложение, в кратком изложении, о характере судебного разбирательства, о том, какое судебное разбирательство испрашивается, о фактах, на которых основывается подсудность, и основаниях, на которых ищется облегчения, и молятся об облегчении.Эта формулировка взята из раздела 4 Закона о пересмотре административных распоряжений Хоббса 1950 г., 64 Stat. 1130, реконструировано как 28 U.S.C. §2344 (28 U.S.C.A. §2344 (Дополнение 1966 г.)). Несколько других законодательных актов также предписывают содержание петиции, но подавляющее большинство молчит по этому поводу. Предлагаемое правило заменяет 28 U.S.C. § 2344 и другие законодательные положения, устанавливающие форму петиции о пересмотре и разрешающие инициировать пересмотр путем подачи простой петиции, аналогичной по форме уведомлению об апелляции, используемом в апелляциях на решения районных судов.Требуемая в настоящее время более сложная форма петиции о пересмотре редко бывает полезной ни для тяжущихся сторон, ни для судов. Не существует эффективного и разумного способа заставить петиционеров обратиться к реальным вопросам до того, как эти вопросы будут сформулированы в кратких сводках. Остальные положения этого раздела взяты из разделов 1 и 2 единого правила.

Подраздел (б) . Это подразделение происходит из разделов 3, 4 и 5 единого правила.

Подраздел (c) .Это подразделение происходит из раздела 1 единого правила.

Подраздел (г) . Это подразделение основано на разделе 6 единого правила. Устав иногда разрешает вмешательство путем подачи уведомления о намерении вмешаться. Единое правило не устанавливает предельный срок для вмешательства, и единственные временные рамки, установленные законом, — это 30-дневные периоды, указанные в поправках к Закону о связи 1952 г., §402 (e), 66 Stat. 719, 47 U.S.C. §402 (e) и Закон о сахаре 1948 года, §205 (d), 61 Stat.927, 7 U.S.C. §1115 (d).

Записки Консультативного комитета по правилам — поправка 1993 г.

Подраздел (а) . Поправка является дополнением к поправке к Правилу 3 (c). Как в Правиле 3 (c), так и в Правиле 15 (a) указано, что в уведомлении об апелляции или ходатайстве о пересмотре должны быть указаны стороны, запрашивающие апелляционное рассмотрение. Правило 3 (c), однако, предоставляет поверенному, который представляет более чем одну сторону при подаче апелляции, возможность гибко описывать стороны в общих чертах, а не называть их по отдельности.Правило 15 (а) не допускает такой гибкости; должен быть назван каждый заявитель. Петиция о пересмотре решения агентства является первой подачей в любой суд и, следовательно, аналогична жалобе, в которой должны быть указаны все стороны.

Подраздел (е) . Поправка добавляет подраздел (е). Подраздел (e) соответствует Правилу 3 (e), которое требует уплаты пошлин при подаче уведомления об апелляции. Отсутствие такого требования в Правиле 15 является очевидным упущением. В пяти округах действуют местные правила, требующие уплаты таких сборов, см., Эл.g ., Fifth Cir. Loc. R. 15.1 и Fed. Cir. Loc. Р. 15 (а) (2).

Комментарии Комитета к Правилам — поправка 1998 года

Язык и организация правила изменены, чтобы сделать правило более понятным. В дополнение к изменениям, внесенным для улучшения понимания, Консультативный комитет изменил язык, чтобы сделать стиль и терминологию единообразными во всех правилах апелляции. Эти изменения носят чисто стилистический характер.

Комментарии Комитета к Правилам — поправка 2009 г.

Подраздел (б) (2) .Срок, установленный в предыдущем правиле в 20 дней, был изменен на 21 день. См. Примечание к Правилу 26.

Программа содействия исследовательской работе для преподавателей (FRAP) | Бакалавриат Исследовательская и творческая деятельность

Факультет

Общая информация для факультета

Если вы хотите, чтобы к вашему проекту присоединились исследователи из Колледжа литературы и науки, вы имеете право подать заявку на получение до пяти (5) грантов по 350 долларов в квартал (осенью, зимой и весной).

Заявки принимаются не позднее 23:59 23 октября 2020 г. для осени, 15 января 2021 г. для зимы и 16 апреля 2021 г. для весны.

Для получения финансирования необходимо:

1. Разместите свой исследовательский проект в справочнике FRAP
   
2. Попросите студентов-исследователей записаться на курс 99 / 99RA или 199 / 199RA вашего факультета с вами в качестве официального инструктора
   
3. Быть членом Академического Сената
   
4. Не подавать заявку на финансирование с одним и тем же студентом более чем на три (3) квартала
   
5. Подайте по одной заявке на каждого научного сотрудника до крайнего срока

Дополнительная информация

Присужденные средства будут использоваться для покрытия расходов, связанных с проектом, за исключением заработной платы, мебели, компьютеров или другого оборудования.

Ассистенты-исследователи бакалавриата не могут получать заработную плату из этой премии. Финансирование должно быть использовано до конца финансового года (30 июня), в котором оно было предоставлено, а любые неиспользованные средства должны быть возвращены в Колледж литературы и науки до начала следующего учебного года.

Хотя вы можете подать заявку на получение до пяти (5) грантов в квартал, финансирование не гарантируется для всех заявок.

Соображения по поводу пандемии:

Рассмотрите проекты / задачи, которые учитывают безопасность и социальное дистанцирование (т.д., обзоры литературы, теоретическая / концептуальная работа, анализ онлайн-данных / ранее собранных данных и т. д.)

Справедливость в исследованиях во время пандемии. Признано, что пандемия может непропорционально сильно повлиять на некоторые виды исследований. По возможности мы поощряем разумную адаптацию, которая позволяет преподавателям и студентам продвигаться вперед с исследовательским опытом / целями.

Интернет-кампус ZEISS Microscopy | Ссылки FRAP

Воспользовавшись возможностью отслеживать динамическое поведение живых клеток с помощью слияния флуоресцентных белков с внутриклеточными мишенями, метод восстановления флуоресценции после фотообесцвечивания (FRAP) и связанные с ним методы (потеря фотообесцвечивания; FLIP и обратный FRAP; iFRAP) доказали свою эффективность. полезен для изучения кинетического поведения белков.Все эти эксперименты основаны на выборочном фотообесцвечивании флуоресценции в интересующей области с помощью высокоинтенсивного лазера с последующим мониторингом диффузии новых флуоресцентных молекул в обесцвеченную область в течение определенного периода времени с помощью низкоинтенсивного лазерного света. Методы фотообесцвечивания идеально подходят для определения кинетических свойств, включая коэффициент диффузии, подвижную фракцию и скорость переноса белков при визуализации живых клеток.

Уайт, Дж. И Стельцер, Э.

Фотообесцвечивание GFP показывает динамику белка внутри живых клеток. Trends in Cell Biology 9 : 61-65 (1999). Отличный обзор методов FRAP и FLIP применительно к флуоресцентным белкам в культивируемых клетках. В статье обсуждаются практические аспекты, изучаются расчеты мобильности и приводятся яркие, хорошо отработанные примеры обоих методов в живых клетках.

Lippincott-Schwartz, J., Snapp, E. and Kenworthy, A.

Изучение динамики белков в живых клетках. Nature Reviews Molecular Cell Biology 2 : 444-456 (2001). Исчерпывающий и хорошо написанный обзор с подробной библиографией методов, используемых для мониторинга клеточной динамики с использованием методов фотообесцвечивания. Включены обсуждение теории диффузии, введение в анализ мобильности белка и многочисленные сравнительные примеры скорости диффузии белка.

Reits, E. A. J. и Neefjes, J. J.

От фиксированного к FRAP: Измерение подвижности и активности белков в живых клетках. Nature Cell Biology 3 : E145-E147 (2001). Авторы описывают измерения кинетики фотообесцвечивания с использованием флуоресцентных белков в отдельных клетках и приводят несколько примеров. Также обсуждаются основные аспекты вычислений FRAP и анализа данных.

Зайфферт, С. и Опперманн, В.

Систематическая оценка экспериментов FRAP, выполненных в конфокальном лазерном сканирующем микроскопе Journal of Microscopy 220 : 20-30 (2005).Систематический анализ измерений FRAP с использованием строго определенных модельных систем в конфокальной микроскопии. Обсуждаются теоретические основы FRAP, оценка пространственно разрешенных данных, оценки коэффициента диффузии и экспериментальные протоколы.

Sprague, B. L. и McNally, J. G.

FRAP-анализ связывания: правильный и подходящий. Тенденции в клеточной биологии 15 : 84-91 (2005). Подробный обзор методов фотообесцвечивания, включающий предложения по количественной интерпретации кривых восстановления.Этот документ также является отличным источником информации об основных аспектах FRAP и содержит многочисленные ссылки.

Карреро, Г., Макдональд, Д., Кроуфорд, Э., де Фрис, Г. и Хендзель, М. Дж.

Использование FRAP и математического моделирования для определения in vivo кинетики ядерных белков. Методы 29 : 14-28 (2003). Авторы исследуют экспериментальный план, математическое моделирование и анализ экспериментов FRAP для извлечения информации о распределении белка между мобильными и иммобилизованными пулами с ограниченным компартментом (ядром).

Коул, Н. Б., Смит, К. Л., Скиаки, Н., Терасаки, М., Эдидин, М. и Липпинкотт-Шварц, J.

Диффузионная подвижность белков Гольджи в мембранах живых клеток Science 273 : 797-801 (1996). Классическая статья и одна из первых, в которых представлены данные FRAP с использованием слияния EGFP с мембранными белками Гольджи и эндоплазматического ретикулума. Экспериментальный подход, описанный в этом отчете, заложил основу для изучения кинетики живых клеток с флуоресцентными белками.

Клонис, Н., Коврик, М., Харпер, И., Уикхэм, М., Коуман, А. и Тилли, Л.

Анализ флуоресцентного фотообесцвечивания для изучения динамики клеток. European Biophysics Journal 31 : 36-51 (2002). В этом обзоре авторы рассматривают теорию и практику проведения исследований фотообесцвечивания с помощью конфокальной микроскопии. Включены несколько приложений, использующих флуоресцентные белки, а также исчерпывающий справочник по литературе в этой области.

Кёстер, М., Фрам, Т. и Хаузер, Х.

Ядерно-цитоплазматическое челночное перемещение выявлено с помощью технологий FRAP и FLIP. Current Opinion in Biotechnology 16 : 28-34 (2005). Подробное обсуждение основных методов FRAP и FLIP с приложениями к перемещению белков между клеточными компартментами. В статье есть несколько хороших примеров сбора и анализа экспериментальных данных.

Фейр, Р. Д. и Мистели, Т.

Кинетическое моделирование подходов к визуализации in vivo . Nature Reviews Molecular Cell Biology 2 : 898-907 (2001). Общий обзор динамики белков с акцентом на флуоресцентные слияния белков. Авторы обсуждают практические аспекты и создание вычислительных моделей для FRAP, FLIM и корреляционной спектроскопии с несколькими примерами приложений.

Предварительно скрининговые условия липидной кубической фазы для роста кристаллов белка

2017

Методы исследования олигомерной структуры рецепторов, связанных с G-белком

Гуо Х, Ан С., Уорд Р. и др.Методы, используемые для изучения олигомерной структуры рецепторов, связанных с G-белками. Bioscience Reports . 2017; 37 (2): BSR20160547. DOI: 10.1042 / BSR20160547.

2015

Салом Д., Падаятти П.С., Пальчевски К. Кристаллизация рецепторов, связанных с G-белком. Методы клеточной биологии . 2013; 117: 451-468. DOI: 10.1016 / B978-0-12-408143-7.00024-4.

Густаво Феналти, Энрике Э. Абола, Чонг Ван, Бейли Ву, Вадим Черезов, Глава двадцать — Восстановление флуоресценции после фотообесцвечивания в липидной кубической фазе (LCP-FRAP): анализ до кристаллизации мембранных белков, редактор (ы): Арун К.Шукла, Методы в энзимологии, Academic Press, том 557, 2015, страницы 417-437, ISSN 0076-6879, ISBN 9780128021835, https://doi.org/10.1016/bs.mie.2014.12.008.

Милич Д., Вепринцев ДБ. Крупномасштабное производство и белковая инженерия рецепторов, связанных с G-белками, для структурных исследований. Границы фармакологии . 2015; 6: 66. DOI: 10.3389 / fphar.2015.00066.

2014

Синь Инь, Хэнхао Сю, Майкл Хансон и Вэй Лю, Кристаллизация GPCR с использованием липидной кубической фазы, Текущая фармацевтическая биотехнология, том 15, выпуск 10, страницы 971-979, год 2014, issn 1389-2010 / 1873-4316, doi 10 .2174/1389201015666140922110325

2013

Siu FY, He M, de Graaf C. и др. Структура человеческого рецептора глюкагона G класса B. Природа . 2013; 499 (7459): 10.1038 / nature12393. DOI: 10,1038 / природа12393.

2012 г.

Стивенс Р.К., Черезов В., Катрич В. и др. Сеть GPCR: крупномасштабное сотрудничество по структуре и функциям GPCR. Обзоры природы Открытие лекарств .2013; 12 (1): 25-34. DOI: 10,1038 / NRD3859.

2011 г.

Фэй Сюй, Вэй Лю, Майкл А. Хансон, Раймонд С. Стивенс и Вадим Черезов

Рост и дизайн кристаллов 2011 11 (4), 1193-1201

DOI: 10.1021 / cg101385e

Джозеф Дж. С., Лю В., Кункен Дж., Вайс Т. М., Цурута Х., Черезов В. Характеристика липидных матриц для кристаллизации мембранных белков с помощью высокопроизводительного малоуглового рассеяния рентгеновских лучей. Методы (Сан-Диего, Калифорния) . 2011; 55 (4): 342-349. DOI: 10.1016 / j.ymeth.2011.08.013.

Черезов В. Липидные кубические фазовые технологии для структурных исследований мембранных белков. Современные взгляды в структурной биологии . 2011; 21 (4): 559-566. DOI: 10.1016 / j.sbi.2011.06.007.

2008

Вадим Черезов, Джеффри Лю, Марк Гриффит, Майкл А. Хэнсон и Раймонд С. Стивенс

Рост и дизайн кристаллов 2008 8 (12), 4307-4315

DOI: 10.1021 / cg800778j

Восстановление флуоресценции после фотообесцвечивания — обзор

4 Определение наноразмерной биомолекулярной диффузии в жидких каплях с использованием восстановления флуоресценции после фотообесцвечивания (FRAP): Concepts

Восстановление флуоресценции после фотообесцвечивания (FRAP) — широко используемый метод для исследования коэффициента диффузии флуоресцентно меченого белка / Молекулы РНК в биомолекулярных конденсатах in vitro и in vivo (Banerjee, Milin, Moosa, Onuchic, & Deniz, 2017; Elbaum-Garfinkle et al., 2015; Feric et al., 2016; Jain et al., 2016; Kroschwald et al., 2015; Ли и др., 2012; Molliex et al., 2015). Концепция FRAP основана на мониторинге скорости обмена меченых молекул между интересующей областью и окружающей средой, которая впоследствии используется для количественной оценки динамики их диффузии. Чтобы достичь этого, интересующая область (ROI) внутри капли необратимо фотообесцвечивается посредством лазерного возбуждения высокой мощности. Обесцвечивание — это результат фотохимического повреждения флуоресцентных зондов, в результате чего они навсегда теряют способность к флуоресценции (Kubitscheck & Peters, 2013).Это приводит к тому, что ROI имеет значительно более низкую (или нулевую) интенсивность флуоресценции по сравнению с окружающими областями (фиг. 8A). Затем отслеживают восстановление интенсивности флуоресценции в обесцвеченной области как функцию времени. Если меченые частицы претерпевают быструю диффузию, скорость обмена между обесцвеченной областью и окружающей областью будет высокой, и результирующее время восстановления будет коротким. И наоборот, время восстановления для молекулярных частиц с медленной динамикой диффузии будет долгим.

Рис. 8. (A) Диаграмма, иллюстрирующая концепцию эксперимента FRAP. Каждая зеленая точка представляет собой одну молекулу с флуоресцентной меткой. (B) Кривая восстановления FRAP, показывающая полное восстановление. Однонаправленная красная стрелка указывает полупериод восстановления. Двуглавая красная стрелка указывает на восстановленную интенсивность. (C) Кривая восстановления FRAP, показывающая частичное восстановление. Красная пунктирная двусторонняя стрелка указывает восстановленную интенсивность [доля подвижной фазы составляет 50% в (C) и 100% в (B)]. Синяя пунктирная двусторонняя стрелка указывает глубину обесцвечивания.

Информация, которую можно извлечь из FRAP, зависит от двух параметров: полупериода восстановления и доли подвижной фазы. Половина восстановления определяется как время, необходимое обесцвеченной области, чтобы восстановить половину своей конечной интенсивности, что дает представление о том, насколько быстро меченые молекулы диффундируют (рис. 8B). Доля подвижной фазы оценивается отношением интенсивности восстановленной флуоресценции обесцвеченного пятна к глубине обесцвечивания (рис. 8C). Если меченые частицы полностью подвижны (как в случае чисто вязкой жидкости), ожидается, что доля подвижной фазы составит ~ 100% (рис.8Б). Если меченый вид имеет две популяции, подвижную и неподвижную, доля подвижной фазы обычно намного меньше 100%, что классически интерпретируется как кажущаяся вязкоупругость (рис. 8C). В идеале кажущиеся коэффициенты диффузии могут быть извлечены из кривых FRAP путем подгонки кривой времени восстановления с соответствующей моделью диффузии, однако FRAP легче использовать только для качественной оценки подвижности исследуемых молекул.

Во многих исследованиях использовался FRAP для измерения коэффициента диффузии молекул в биомолекулярных конденсатах с использованием очищенных in vitro систем и в клетках (Alshareedah et al., 2019; Banerjee et al., 2017; Эльбаум-Гарфинкль и др., 2015; Feric et al., 2016; Jain et al., 2016; Каур и др., 2019; Kroschwald et al., 2015; Ли и др., 2012; Molliex et al., 2015; Onuchic et al., 2019; Патель и др., 2015; Тейлор, Вей, Стоун и Брэнгвинн, 2019; Wang et al., 2018). Хотя реализация эксперимента и анализа довольно проста, интерпретация результатов FRAP оказалась сложной и часто требует внимательного рассмотрения в каждом конкретном случае. Например, скорость восстановления FRAP чувствительно зависит от молекулярной идентичности меченых видов в случае гетеротипических конденсатов, содержащих несколько молекулярных видов (Boeynaems et al., 2019; Chalupníková et al., 2008; Weidtkamp-Peters et al., 2008). В одном и том же биомолекулярном конденсате измерения FRAP одного компонента могут выявить жидкоподобное поведение (полное восстановление), в то время как тот же анализ другого компонента может выявить вязкоупругое поведение (частичное восстановление) (Chalupníková et al., 2008; Weidtkamp-Peters et al. ., 2008). Это изменение результатов FRAP с молекулами зонда для многокомпонентных конденсатов интерпретируется как результат дифференциальных межмолекулярных взаимодействий и пространственных неоднородностей внутри капли.Это различное поведение FRAP можно рационализировать в свете модели «скаффолд-клиент». Как отмечалось ранее, каркасы — это биополимеры, которые имеют поливалентные связывающие домены. С другой стороны, клиенты не нуждаются в многовалентности и могут разделяться в конденсате с помощью одновалентных модулей связывания каркаса (Banani et al., 2017). Следовательно, взаимодействие скаффолда и клиента может быть более временным, чем взаимодействие скаффолда и скаффолда. Следовательно, ожидается, что каркасы по своей природе будут иметь более низкую подвижность, чем клиенты, поскольку каркас обеспечивает значительно больше и, возможно, более сильных межмолекулярных контактов по сравнению с клиентом (Alberti, 2017b; Banani et al., 2016). Помимо такой динамики коэффициента диффузии, зависящей от компонентов, недавнее исследование показало, что извлеченные коэффициенты диффузии сильно зависят от размерности модели диффузии, используемой для соответствия данным, а также граничных условий, при этом между различными моделями наблюдается большая разница (Taylor и др.